Test de diagnostic rapide du paludisme Pf/Pv Ag (sang total)

Paludisme Test rapide Ag Pf/Pv (sang total)

UTILISATION PRÉVUE

Le test rapide du paludisme est un test immunologique chromatographique à flux latéral pour la détection et la différenciation simultanées de Plasmodium falciparum (Pf) antigène et P. vivax, P. ovale, ou P. antigène malariae dans le sang total. Ce dispositif est destiné à être utilisé comme test de dépistage et comme aide au diagnostic de l'infection à Plasmodium. Tout spécimen réactif avec le test rapide du paludisme doit être confirmé avec d'autres méthodes de test et les résultats cliniques.

RÉSUMÉ ET EXPLICATION DU TEST

Le paludisme est une maladie fébrile, hémolytique, transmise par les moustiques, qui infecte plus de 200 millions de personnes et tue plus de 1 million de personnes par an. Elle est causée par quatre espèces de Plasmodium : P. falciparum, P. vivax, P. ovale et P. malariae. Ces plasmodies infectent et détruisent toutes les érythrocytes humains, produisant des frissons, de la fièvre, de l'anémie et une splénomégalie. P. falciparum cause une maladie plus grave que les autres espèces de plasmodies et est responsable de la plupart des décès dus au paludisme. P. falciparum et P. vivax sont les agents pathogènes les plus courants, cependant, il existe une variation géographique considérable dans la répartition des espèces1. Traditionnellement, le paludisme est diagnostiqué par la démonstration des organismes sur des frottis sanguins périphériques colorés au Giemsa, et les différentes espèces de plasmodium sont distinguées par leur apparence dans les érythrocytes infectés1. La technique est capable d'un diagnostic précis et fiable, mais seulement lorsqu'elle est effectuée par des microscopistes qualifiés utilisant des protocoles définis2, ce qui présente des obstacles majeurs pour les zones reculées et pauvres du monde.

Le test rapide du paludisme est développé pour résoudre ces obstacles ci-dessus. Il détecte les anticorps générés dans le sérum ou le plasma en réponse à l'infection par le plasmodium. En utilisant l'antigène spécifique Pf (HRP-II) et l'antigène pan-paludisme (aldolase), le test permet la détection et la différenciation simultanées de l'infection par P. falciparum et/ou P. vivax, ovale et malariae3-5, par du personnel non formé ou peu qualifié, sans équipement de laboratoire.

PRINCIPE

Le test rapide du paludisme est un test immunologique chromatographique à flux latéral. La cassette de test se compose de : 1) une pastille conjuguée de couleur bordeaux contenant un anticorps anti-pHRP-II de souris conjugué à de l'or colloïdal (conjugués pHRP II-or) et un anticorps anti-pLDH de souris conjugué à de l'or colloïdal (conjugués pLDH-or), 2) une bandelette de membrane de nitrocellulose contenant deux bandes de test (bandes T1 et T2) et une bande de contrôle (bande C). La bande T1 est pré-enduite d'un anticorps monoclonal anti-pLDH grâce auquel l'infection par l'une des quatre espèces de plasmodies peut être détectée, la bande T2 est pré-enduite d'anticorps polyclonaux anti-pHRP-II pour la détection de l'infection à Pf, et la bande C est enduite d'IgG anti-souris de chèvre.

Pendant le test, un volume adéquat de l'échantillon de sang est versé dans le puits d'échantillon (S) de la cassette de test, un tampon de lyse est ajouté au puits de tampon (B). Le tampon contient un détergent qui lyse les globules rouges et libère divers antigènes de plasmodium, qui migrent par capillarité à travers la bandelette maintenue dans la cassette.

pHRP-II, s'il est présent dans l'échantillon, se liera aux conjugués pHRP II-or. L'immunocomplexe est ensuite capturé sur la membrane par les anticorps anti-pHRP-II pré-enduites, formant une bande T2 de couleur bordeaux, indiquant un résultat de test Pf positif.

pLDH, s'il est présent dans l'échantillon, se liera aux conjugués pLDH-or. L'immunocomplexe est ensuite capturé sur la membrane par l'anticorps anti-pLDH pré-enduite, formant une bande T1 de couleur bordeaux, indiquant un résultat de test positif au plasmodium. En l'absence de bande T2, un résultat de test positif pour l'une des trois autres plasmodies peut être recommandé.

L'absence de toute bande T (T1 et T2) suggère un résultat négatif. Le test contient un contrôle interne (bande C) qui doit présenter une bande de couleur bordeaux de l'immunocomplexe d'IgG anti-souris de chèvre/IgG de souris (conjugués pHRP-II et pLDH-or) indépendamment du développement de la couleur sur l'une des bandes T. Sinon, le résultat du test est invalide et l'échantillon doit être retesté avec un autre dispositif.

STOCKAGE

Conserver les kits de test à température ambiante 4-30 degrés C. La pochette scellée a une durée de conservation de 24 mois. de transmission de la maladie.

AVERTISSEMENTS ET PRÉCAUTIONS

1. Pour usage diagnostique in vitro uniquement

2. Tous les échantillons de patients doivent être traités comme s'ils étaient capables de transmettre la maladie.

3. Ne pas intervertir les réactifs de différents lots. Ne pas utiliser au-delà de la date d'expiration.

RÉACTIFS ET MATÉRIELS FOURNIS

1. Une pochette scellée avec un dessiccatif

2. Tampon diluant sanguin dans un flacon compte-gouttes

3. Une notice d'emballage

MATÉRIEL REQUIS MAIS NON FOURNI

1. Horloge ou Minuteur

2. Dispositif de lancette pour le test sur sang total

PRÉLÈVEMENT ET PRÉPARATION DES ÉCHANTILLONS

Sang total

Des gouttes de sang total peuvent être obtenues par piqûre du bout du doigt ou par ponction veineuse. Ne pas utiliser de sang hémolysé pour les tests.

Les échantillons de sang total doivent être conservés au réfrigérateur (2°Ċ-8 °Ċ) s'ils ne sont pas testés immédiatement. Les échantillons doivent être testés dans les 24 heures suivant le prélèvement.

Tester les échantillons dès que possible après le prélèvement. Conserver les échantillons à 2 à 8 °Ċ s'ils ne sont pas testés immédiatement.

Conserver les échantillons à 2 à 8 °Ċ jusqu'à 5 jours. Les échantillons doivent être congelés à -20 °Ċ pour une conservation plus longue.

Éviter les cycles de congélation-décongélation multiples. Avant le test, amener lentement les échantillons congelés à température ambiante et mélanger doucement. Les échantillons contenant des matières particulaires visibles doivent être clarifiés par centrifugation avant le test.

PROCÉDURE DE DOSAGE

Étape 1 : Amener l'échantillon et les composants du test à température ambiante s'ils sont réfrigérés ou congelés. Bien mélanger l'échantillon avant le test une fois décongelé.

Étape 2 : Lorsque vous êtes prêt à tester, ouvrez la pochette au niveau de l'encoche et retirez le dispositif. Placez le dispositif de test sur une surface propre et plane.

Étape 3 : Assurez-vous d'étiqueter le dispositif avec le numéro d'identification de l'échantillon.

Étape 4 : Appliquer 5 µl de sang total dans le puits d'échantillon. Ajouter ensuite 4 gouttes de diluant d'échantillon. Après 5 minutes, ajouter à nouveau 2 gouttes.

Étape 5 : Régler la minuterie.

Étape 6 : Les résultats peuvent être lus en 30 minutes. Les résultats positifs peuvent être visibles en aussi peu qu'1 minute.

Remarque : Ne pas lire le résultat après 30 minutes. Pour éviter toute confusion, jeter le dispositif de test après avoir interprété le résultat.

INTERPRÉTATION DES RÉSULTATS

Négatif: Si seule la bande C est présente, l'absence de toute couleur bordeaux dans les deux bandes T (T1 et T2) indique qu'aucun antigène de plasmodium n'est détecté. Le résultat est négatif.

Positif:

Pf positif : En plus de la présence de la bande C, si seule la bande T2 est développée, le test indique la présence de l'antigène pHRP-II. Le résultat est Pf positif.

Pv positif : En plus de la présence de la bande C, si seule la bande T1 est développée, le test indique la présence de l'antigène pLDH. Le résultat est soit Pv, Pm, ou Po positif.

Positif mixte : En plus de la présence de la bande C, les bandes T1 et T2 sont développées, le test indique la présence à la fois de pHRP-II et de pLDH. Le résultat est positif.

Remarque : Les échantillons avec des résultats positifs doivent être confirmés avec d'autres méthodes de test et les résultats cliniques avant qu'une détermination positive ne soit faite.

Invalide: Si aucune bande C n'est développée, le test est invalide, quelle que soit la couleur bordeaux dans les bandes T, comme indiqué ci-dessous. Répéter le test avec un nouveau dispositif.

LIMITATION

1. La procédure de dosage et l'interprétation des résultats du test doivent être suivies de près lors du test de la présence d'antigène de protozoaire plasmodium dans le sang total de sujets individuels. Le non-respect de la procédure peut donner des résultats inexacts.

2. Le test rapide du paludisme est limité à la détection qualitative de l'antigène de protozoaire plasmodium dans le sang total. L'intensité de la bande de test n'a pas de corrélation linéaire avec le titre d'antigène dans l'échantillon.

3. En cas de co-infection avec Pf et l'une des trois autres plasmodies, les bandes T1 et T2 seront développées. Par conséquent, interpréter le résultat avec prudence lorsque les bandes T1 et T2 sont visibles.

4. Un résultat négatif pour un sujet individuel indique l'absence d'antigène de protozoaire plasmodium détectable. Cependant, un résultat de test négatif n'exclut pas la possibilité d'une exposition ou d'une infection par des protozoaires plasmodium.

5. Un résultat négatif peut se produire si la quantité d'antigène de protozoaire plasmodium présent dans l'échantillon est inférieure à la détection dans laquelle un échantillon est prélevé.

6. Certains échantillons contenant un titre inhabituellement élevé d'anticorps hétérophiles ou de facteur rhumatoïde peuvent affecter les résultats attendus.

7. Les résultats obtenus avec ce test ne doivent être interprétés qu'en conjonction avec d'autres procédures de diagnostic et les résultats cliniques.

RÉFÉRENCE

1. Paludisme, p. 421-424. Chapitre 9. Maladies infectieuses et parasitaires. Rubin E., Farber JL. Pathologie, 2e éd. 1994. J.B. Lippincott, Philadelphie.

2. Cooke AH, Chiodini PL, Doherty T, et al, Am J Trop Med. Hyp, 1999, février : 60(2):173-2

3. Guthmann JP, et al : Trans R Soc Trop Med Hyg. 2002, 96(3):254-7

4. Kar I, Eapen A, Adak T, Sharma VP, Indian J Malariol. 1998, 35(3):160- 2

5. Mills CD, Burgess DC, Taylor HJ, Kain KC. Bull World Health Organ. 1999;77(7):553-9

6. Cloonan N, Fischer K, Cheng Q, Saul A. Mol Biochem Parasitol. 113(2):327-30.

Span Biotech Ltd. est une entreprise de recherche pour les tests rapides, avec un fort soutien du National Key Laboratory of Technology Projects of 10^e et 11^e Plan quinquennal et de la Faculté des sciences de la vie de l'Université HuBei. SpanBio abrite également une équipe de R&D qui développe des techniques de recombinaison génétique, de culture cellulaire et de purification des protéines. SpanBio accorde une attention particulière aux tests rapides pour les êtres humains, les maladies animales et la détection de la sécurité alimentaire. Elle fournit un certain nombre de services personnalisés aux distributeurs professionnels et aux sociétés affiliées partenaires avec une excellente qualité, des prix compétitifs et un super service.

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