Anticardiolipin humain IgG (ACA IgG) ELISA Kit

Anticardiolipin humain IgG (ACA IgG) ELISA Kit

Les types témoin ont validé : Sérum, plasma sanguin, salive, urine, et tout autre liquide relatif de tissu.

POUR L'USAGE DE RECHERCHES SEULEMENT. PAS POUR L'USAGE DES PROCÉDURES DE DIAGNOSTIC.

Lisez soigneusement cette instruction avant utilisation. Le kit d'ELISA est basé sur le principe de la technique de sandwich à double-antigène pour détecter Anticardiolipin humain IgG (ACA IgG). Soyez employé seulement pour des recherches, pour ne pas être employé pour le diagnostic médical.

Utilisation prévue

Ce kit est employé pour analyser l'Anticardiolipin IgG (ACA IgG) dans l'échantillon du sérum de l'humain, du plasma sanguin, et de tout autre liquide relatif de tissu.

Principe d'essai

Le kit emploie une analyse d'immunosorbant enzyme-liée par sandwich de double-antigène (ELISA) pour analyser le niveau d'Anticardiolipin humain IgG (ACA IgG) dans les échantillons.  Ajoutez Anticardiolipin humain IgG (ACA IgG) au microelisa humain enduit d'un préenduisage d'Anticardiolipin IgG bien, incubation ; lavage. Ajoutez HRP a étiqueté Anticardiolipin humain IgG. Après une incubation et un lavage différents, éliminez l'enzyme non liée, puis ajoutez la solution A, B, la couleur de chromogène du changement liquide dans le bleu, et à l'effet de l'acide la couleur finalement pour devenir jaune. Utilisant le lecteur micro de plat de la longueur d'onde 450nm pour mesurer l'absorptivité (valeur d'OD), et rivaliser avec la valeur critique pour déterminer l'existence de l'Anticardiolipin humain IgG (ACA IgG) de l'échantillon.

Matériaux assurés dans le kit d'essai

Matériaux requis mais non assurés

1. incubateur de 37 ℃                              2. lecteur d'enzymes de norme

3. Pipettes de précision et astuces jetables de pipette      4. eau distillée

5. Tubes jetables pour la dilution d'échantillon             6. papier d'absorbant

Notes importantes

1.          Le kit sort de l'environnement 2-8℃, devrait être équilibré 30 minutes dans la température ambiante emploient alors. Si le stripplate de microelisa a pour ne pas employer après ouvert, le plat devrait être stocké dans le sac scellé.

2.          Ajoutez l'échantillon avec l'échantillonneur chaque étape, et corrigez sur épreuves son exactitude fréquemment, évitez l'erreur expérimentale.

3.          Recommandé que tous les matériaux standard, échantillons d'essai sont faire double. Si le contenu matériel de essai dans l'échantillon est excessivement à hauteur, employez svp la dilution d'échantillon pour diluer certain multiple (des temps de n), puis analyse. Veuillez multiplier les temps totaux de dilution quand calculez (×n×5)

4.          L'opération a effectué dans l'accord strict avec des instructions, résultats d'essai doit être basée sur le lecteur de microplate pour déterminer des lectures régnera

5.          Afin d'éviter la contamination transversale, éviter la réutilisation dans les mains de la membrane de plat de tête et de joint d'aspiration

6.           D'autres agents ne doivent pas être empaquetés ou couverts, ce réactif que le composant différent de numéro de lot ne mélangent pas.

Méthode manuellement de lavage

secouez loin restent liquides dans les plats d'enzymes ; placez quelques papiers adonnés à la boisson sur le banc d'essai, et agitez les plats sur le à l'envers fortement. Injectez au moins la solution de lavage de l'après-dilution 0.35ml dans le puits, et marinez 1~2 minutes. Répétez ce processus selon vos conditions.

Méthode de lavage automatique

s'il y a machine à laver automatique, elle devrait seulement être employée dans l'essai quand vous êtes tout à fait au courant de sa fonction et représentation.

Conditions de spécimen

1.Samples contenant NaN3 ne doit pas être examiné pendant qu'il empêche l'activité de la peroxydase de raifort sauvage (HRP).

2.After rassemblant l'échantillon, extraction devrait être immédiatement effectué selon des documents connexes. Après extraction, l'expérience devrait être immédiatement aussi bien entreprise. Autrement, gardez l'échantillon à -20℃. Avoid a répété les cycles gel-dégel.

3.Serum : Permettez au sérum de coaguler pendant 10-20 minutes à la température ambiante. Centrifugeuse (à 2000-3000 t/mn) pendant 20 minutes. Rassemblez les supernatants soigneusement. Quand les sédiments se sont produits pendant le stockage, la centrifugation devrait être effectuée encore.

plasma 4.Blood : Selon les conditions de la collection témoin, l'EDTA ou le citrate sodique devrait être employé en tant qu'anti coagulation. Ajoutez l'EDTA ou le citrate sodique et mélangez-les pendant 10-20 minutes. Centrifugeuse (à 2000-3000 t/mn) pendant approximativement 20 minutes. Rassemblez les supernatants soigneusement. Quand les sédiments se sont produits pendant le stockage, la centrifugation devrait être effectuée encore.

5.Urine : Rassemblez par le tube stérile. Centrifugeuse (à 2000-3000 t/mn) pendant approximativement 20 minutes. Rassemblez les supernatants soigneusement. Quand les sédiments se sont produits pendant le stockage, la centrifugation devrait être effectuée encore. En rassemblant le fluide pleuroperitoneal et le fluide céphalo-rachidien, suivez svp les procédures mentionnées ci-dessus.

surnageant de la culture 6.Cell : Rassemblez par les tubes stériles en examinant pour sécréter des composants. Centrifugeuse (à 2000-3000 t/mn) pendant approximativement 20 minutes. Rassemblez les supernatants soigneusement. En examinant les composants dans la cellule, utilisation PBS (pH 7.2-7.4) de diluer la suspension de cellules à la concentration en cellules d'approximativement 1 million/ml. Cellules de dommages pendant les cycles gel-dégel répétés pour laisser les composants intérieurs. Centrifugeuse (à 2000-3000 t/mn) pendant approximativement 20 minutes. Rassemblez les supernatants soigneusement. Quand les sédiments se sont produits pendant le stockage, la centrifugation devrait être effectuée encore.

échantillon 7.Tissue : Incisez l'échantillon et pesez. Ajoutez un PBS (pH 7,4). Gel avec de l'azote liquide immédiatement pour une utilisation ultérieure. Dégelez l'échantillon et gardez-le à 2-8℃. Ajoutez un PBS (pH 7,4) et puis homogénéisez l'échantillon complètement à la main ou le homogénisateur. Centrifugeuse (à 2000-3000 t/mn) pendant approximativement 20 minutes. Rassemblez les supernatants soigneusement. Partie aliquote et garder un pour l'examen et geler les autres pour une utilisation ultérieure.

Procédure d'analyse

1.          Puits vides réglés séparément (les puits vides n'ajoutent pas l'échantillon et le réactif de HRP-conjugué, l'autre chaque opération d'étape est même), puits standard, examinant l'échantillon bien. Ajoutez 50μl standard dilué à la norme bien ; Ajoutez la dilution 40μl d'échantillon à l'échantillon de essai bien que du plat d'analyse, ajoutez alors l'échantillon de essai 10μl (le degré dilué final d'échantillon est 5 fois), et en mélangeant doucement la secousse, incubée 30 minutes au ℃ 37.

2.          Jetez liquide, de séchage, chacun bien pour remplir liquide de lavage dilué 30 par fois, oscillation pendant 30 secondes, jetez le liquide de lavage avec le papier absorbant Pat sec. Répétez cinq fois, Pat sec.

3.          Ajoutez le réactif 50μl de HRP-conjugué à chaque puits, excepté le puits vide. Mélangeant doucement la secousse, incubée 30 minutes au ℃ 37.

4.          Jetez liquide, de séchage, chacun bien pour remplir liquide de lavage dilué 30 par fois, oscillation pendant 30 secondes, jetez le liquide de lavage avec le papier absorbant Pat sec. Répétez cinq fois, Pat sec.

5.          Ajoutez la solution de chromogène une solution B 50μl de 50μl et de chromogène à chaque puits. Doucement le mélange, incubent pour la minute 10 à 37℃.

6.          Ajoutez l'arrêt Solution50μl à chaque puits, arrêtez la réaction (le changement de couleur bleu pour jaunir la couleur immédiatement).

7.          Prenez le blanc bien en tant que zéro, mesure le densit optique (OD) à 450 nanomètre après avoir ajouté la solution d'arrêt et dans 15min

Cause déterminante de résultat :

Validité d'essai : la moyenne de contrôle positif well≥1.00 ; la moyenne de contrôle négatif bien ≤0.10.

Calculez critique (DÉCOUPÉ) : Critical= la moyenne de contrôle négatif bien + 0,15.

Contrôle négatif : échantillon OD< Calculate="" Critical="">

Contrôle positif : OD≥ suffisants calculent critique (DÉCOUPÉ) sont contrôle positif d'ACA IgG.