Essai rapide de Pf/Pv AG de malaria (sang total)

PaludismeTest rapide Pf/Pv Ag (sang total)

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UTILISATION PRÉVUE

Le test rapide de paludisme est un immunodosage par chromatographie à flux latéral pour la détection et la différenciation simultanées dePlasmodium falciparum(Pf) antigène et P.vivax,P.ovale, ou PAntigène du paludismedans le sang total.Cet appareil est destiné à être utilisé comme test de dépistage et comme aide au diagnostic d'une infection à Plasmodium.Tout échantillon réactif avec le test rapide de paludisme doit être confirmé par des méthodes de test alternatives et des résultats cliniques.

RÉSUMÉ ET EXPLICATION DU TEST

Le paludisme est une maladie fébrile, hémolytique et transmise par les moustiques qui infecte plus de 200 millions de personnes et tue plus d'un million de personnes par an.Elle est causée par quatre espèces de Plasmodium : P. falciparum, P. vivax, P.ovale et P. malariae.Ces plasmodes infectent et détruisent tous les érythrocytes humains, provoquant des frissons, de la fièvre, de l'anémie et une splénomégalie.P. falciparum provoque une maladie plus grave que les autres espèces plasmodiales et est responsable de la plupart des décès dus au paludisme.P. falciparum et P. vivax sont les agents pathogènes les plus courants, cependant, il existe une variation géographique considérable dans la distribution des espèces1.Traditionnellement, le paludisme est diagnostiqué par la mise en évidence des organismes sur des frottis de sang périphérique colorés au Giemsa, et les différentes espèces de plasmodium se distinguent par leur apparition dans les érythrocytes infectés1.La technique est capable d'établir un diagnostic précis et fiable, mais uniquement lorsqu'elle est effectuée par des microscopistes qualifiés utilisant des protocoles définis2, ce qui présente des obstacles majeurs pour les régions reculées et pauvres du monde.

Le test rapide de paludisme est développé pour résoudre ces obstacles ci-dessus.Il détecte les anticorps générés dans le sérum ou le plasma en réponse à l'infection à plasmodium.Utilisant le Pf.antigène spécifique (HRP-II) et antigène panpaludique (aldolase), le test permet la détection et la différenciation simultanées de l'infection à P.falciparum et/ou P. vivax, ovale et malariae3-5, par du personnel non formé ou peu qualifié, sans matériel de laboratoire.

PRINCIPE

Le test rapide de paludisme est un immunodosage par chromatographie à flux latéral.La cassette de test comprend : 1) un tampon de conjugué de couleur bordeaux contenant un anticorps de souris anti-pHRP-II conjugué à de l'or colloïde (conjugués pHHRP II-or) et un anticorps de souris anti-pLDH conjugué à de l'or colloïde (conjugués pLDH-or), 2 ) une bandelette de membrane de nitrocellulose contenant deux bandes test (bandes T1 et T2) et une bande contrôle (bande C).La bande T1 est pré-revêtue d'anticorps monoclonaux anti-pLDH par lesquels l'infection par l'une des quatre espèces de plasmodes peut être détectée, la bande T2 est pré-revêtue d'anticorps polyclonaux anti-pHRP-II pour la détection de l'infection Pf , et la bande C est recouverte d'IgG anti-souris de chèvre.

Pendant le test, un volume adéquat de l'échantillon de sang est distribué dans le puits d'échantillon (S) de la cassette de test, un tampon de lyse est ajouté au puits de tampon (B).Le tampon contient un détergent qui lyse les globules rouges et libère divers antigènes plasmodiques, qui migrent par capillarité à travers la bandelette contenue dans la cassette.

Le pHRP-II, s'il est présent dans l'échantillon, se lie aux conjugués pHRP II-or.L'immunocomplexe est ensuite capturé sur la membrane par les anticorps anti-pHRP-II pré-enrobés, formant une bande T2 de couleur bordeaux, indiquant un résultat de test positif Pf.

pLDH, s'il est présent dans l'échantillon, se lie aux conjugués d'or pLDH.L'immunocomplexe est ensuite capturé sur la membrane par l'anticorps anti pLDH pré-enrobé, formant une bande T1 de couleur bordeaux, indiquant un résultat de test positif au plasmodium.En l'absence de bande T2, un résultat de test positif pour l'un des trois autres plasmodes peut être recommandé.

L'absence de toute bande T (T1 et T2) suggère un résultat négatif.Le test contient un contrôle interne (bande C) qui doit présenter une bande de couleur bordeaux de l'immunocomplexe d'IgG anti-souris de chèvre/IgG de souris (conjugués pHHRP-II et pLDH-or) quel que soit le développement de la couleur sur l'une des bandes T .Sinon, le résultat du test est invalide et l'échantillon doit être retesté avec un autre appareil.

STOCKAGE

Conservez les kits de test à température ambiante entre 4 et 30 degrés C. Le sachet scellé a une durée de vie de 24 mois. de transmission de maladies.

AVERTISSEMENT ET PRÉCAUTIONS

1. Pour usage diagnostique in vitro uniquement

2.Tous les échantillons de patients doivent être traités comme s'ils étaient capables de transmettre des maladies.

3.Ne pas intervertir les réactifs de différents lots.Ne l'utilisez pas au-delà de la date de péremption.

RÉACTIFS ET MATÉRIEL FOURNIS

1.Une pochette scellée avec un déshydratant

2..Tampon de diluant sanguin dans un flacon compte-gouttes

3. Une notice d'emballage

MATERIEL NECESSAIRE MAIS NON FOURNI

1. Horloge ou minuterie

2. Autopiqueur pour test sanguin total

PRÉLÈVEMENT ET PRÉPARATION DES ÉCHANTILLONS

Le sang total

Des gouttes de sang total peuvent être obtenues soit par ponction au bout du doigt, soit par ponction veineuse.N'utilisez pas de sang hémolysé pour les tests.

Les échantillons de sang total doivent être conservés au réfrigérateur (2°²-8°²) s'ils ne sont pas testés immédiatement.Les échantillons doivent être testés dans les 24 heures suivant le prélèvement.

Testez les spécimens dès que possible après le prélèvement.Conserver les échantillons entre 2 et 8 °³ s'ils ne sont pas testés immédiatement.

Conserver les échantillons entre 2 et 8 °C jusqu'à 5 jours.Les échantillons doivent être congelés à -20 °Ċ pour une conservation plus longue.

Éviter les cycles de gel-dégel multiples.Avant le test, amener lentement les échantillons congelés à température ambiante et mélanger doucement.Les échantillons contenant des particules visibles doivent être clarifiés par centrifugation avant le test.

PROCÉDURE DE DOSAGE

Étape 1 : Amener l'échantillon et les composants du test à température ambiante s'ils sont réfrigérés ou congelés.Bien mélanger l'échantillon avant le dosage une fois décongelé.

Étape 2 : Lorsque vous êtes prêt à tester, ouvrez la pochette au niveau de l'encoche et retirez l'appareil.Placez le dispositif de test sur une surface plane et propre.

Étape 3 : Assurez-vous d'étiqueter l'appareil avec le numéro d'identification de l'échantillon.

Étape 4 : Appliquez 5 ul de sang total dans le puits d'échantillon. Ajoutez ensuite 4 gouttes de diluant d'échantillon.Après 5min, ajouter à nouveau 2 gouttes.

Étape 5 : Configurez la minuterie.

Étape 6 : Les résultats peuvent être lus en 30 minutes.Les résultats positifs peuvent être visibles en aussi peu que 1 minute.

Noter:Ne pas lire le résultat après 30 minutes.Pour éviter toute confusion, jetez le dispositif de test après avoir interprété le résultat.

INTERPRÉTATION DES RÉSULTATS

Négatif: Si seule la bande C est présente, l'absence de toute couleur bordeaux dans les deux bandes T (T1 et T2) indique qu'aucun antigène de plasmodium n'est détecté.Le résultat est négatif.

Positif:

Pf positif :En plus de la présence de la bande C, si seule la bande T2 est développée, le test indique la présence de l'antigène pHRP-II.Le résultat est Pf positif.

Pv positif :En plus de la présence de la bande C, si seule la bande T1 est développée, le test indique la présence de l'antigène pLDH.Le résultat est soit Pv, Pm ou Po positif.

Positif mitigé :En plus de la présence de la bande C, les bandes T1 et T2 sont développées, le test indique la présence à la fois de pHRP-II et de pLDH.Le résultat est positif.

Noter:Les échantillons avec des résultats positifs doivent être confirmés avec des méthodes de test alternatives et des résultats cliniques avant qu'une détermination positive ne soit faite.

Non valide: Si aucune bande C n'est développée, le test est invalide quelle que soit la couleur bordeaux dans les bandes T comme indiqué ci-dessous.Répétez le test avec un nouvel appareil.

LIMITATION

1. La procédure de test et l'interprétation des résultats du test doivent être suivies de près lors du test de la présence d'antigènes de protozoaires plasmodiques dans le sang total de sujets individuels.Le non-respect de la procédure peut donner des résultats inexacts.

2. Le test rapide de paludisme est limité à la détection qualitative de l'antigène des protozoaires plasmodiques dans le sang total.L'intensité de la bande de test n'a pas de corrélation linéaire avec le titre d'antigène dans l'échantillon.

3. En cas de co-infection avec Pf et l'un des trois autres plasmodes, les bandes T1 et T2 seront développées.Ainsi, interprétez le résultat avec prudence lorsque les bandes T1 et T2 sont visibles.

4. Un résultat négatif pour un sujet individuel indique l'absence d'antigène détectable de protozoaires de plasmodium.Cependant, un résultat de test négatif n'exclut pas la possibilité d'une exposition ou d'une infection par des protozoaires à plasmodium.

5. Un résultat négatif peut se produire si la quantité d'antigène de protozoaire plasmodium présente dans l'échantillon est inférieure à la détection dans laquelle un échantillon est prélevé.

6. Certains échantillons contenant un titre inhabituellement élevé d'anticorps hétérophiles ou de facteur rhumatoïde peuvent affecter les résultats attendus.

7. Les résultats obtenus avec ce test ne doivent être interprétés qu'en conjonction avec d'autres procédures de diagnostic et résultats cliniques.

RÉFÉRENCE

1. Paludisme, p.421-424.Chapitre 9. Maladies infectieuses et parasitaires.Rubin E., Farber JL.Pathologie, 2e éd.1994. JB Lippincott, Philadelphie.

2. Cooke AH, Chiodini PL, Doherty T, et al, Am J Trop Med.Hyp, 1999, février : 60(2):173-2

3. Guthmann JP, et al : Trans R Soc Trop Med Hyg.2002, 96(3):254-7

4. Kar I, Eapen A, Adak T, Sharma VP, Indian J Malariol.1998, 35(3):160-2

5. Mills CD, Burgess DC, Taylor HJ, Kain KC.Bull Organe Mondial de la Santé.1999;77(7):553-9

6. Cloonan N, Fischer K, Cheng Q, Saul A. Mol Biochem Parasitol.113(2):327-30.

Span Biotech Ltd. est une société basée sur la recherche pour les tests rapides, avec un solide soutien du National Key Laboratory of Technology Projects de 10^eet 11^ePlan quinquennal et Faculté des sciences de la vie de l'Université HuBei.SpanBio abritait également une équipe de R&D qui développe des techniques de recombinaison de gènes, de culture cellulaire et de purification de protéines.SpanBio accorde une attention particulière aux tests rapides pour la détection des maladies humaines, animales et de la sécurité alimentaire.Il fournit un certain nombre de services personnalisés aux distributeurs professionnels et aux partenaires affiliés avec une excellente qualité, des prix compétitifs et un super service.

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