Essai rapide en une étape de Leishmania ab

Essai rapide en une étape de Leishmania ab

UTILISATION PRÉVUE

L'essai rapide de Leishmania ab est un immunoessai latéral d'écoulement pour la détection qualitative des anticorps comprenant IgG, IgM, et IgA à la sous-espèce du donovani de Leishmania (donovani de L.), aux protozoans causatifs de leishmaiase viscérale en sérum humain ou au plasma. Cet essai est prévu pour être employé comme test de dépistage et comme aide dans le diagnostic de la maladie de la leishmaiase viscérale. N'importe quel spécimen réactif avec l'essai rapide de Leishmania ab doit être confirmé avec des méthodes d'essai alternatives.

PRINCIPE

La leishmaiase viscérale, ou le Kala-azar, est une infection disséminée provoquée par plusieurs sous-espèces du donovani de L. La maladie est estimée par l'Organisation Mondiale de la Santé (OMS) pour affecter approximativement 12 millions de personnes dans 88 pays¹. Elleest communiquéeàdeshumainspardesmorsuresdes phlébotomes de phlébotome, qui acquièrent l'infection de l'alimentation sur les animaux infectés. Bien que ce soit une maladie pour les pays pauvres, en Europe du Sud, c'est devenu la principale infection opportuniste dans les patients^{2 ou 3de} SIDA.

L'identification de l'organisme de donovani de L. du sang, de la moelle, des ganglions de foie et lymphatiques ou de la rate fournit des moyens définis de diagnostic. Cependant, ces méthodes d'essai sont limitées par la méthode de prélèvement et la condition spéciale d'instrument. Détection sérologique d'anti-l. le donovani ab s'avère un excellent marqueur pour l'infection de la leishmaiase viscérale. Les essais utilisés dans la clinique incluent : ELISA, anticorps fluorescent et essais d'agglutinement directs^4-5. Récemment, l'utilisationde la protéine spécifique de donovani de L. dans l'essai a amélioré la sensibilité et la spécificité spectaculairement^6-7.

L'essai rapide de Leishmania ab est un sérodiagnostic à base de protéines de recombinaison, qui détecte des anticorps comprenant IgG, IgM et IgA à L. Donovani. Cet essai ne fournit un résultat fiable d'ici 10 minutes sans aucune condition d'instrumentation.

PRINCIPE D'ESSAI

L'essai rapide de Leishmania ab est un immunoessai chromatographique d'écoulement latéral. La cassette d'essai se compose : 1) une protection conjuguée colorée par Bourgogne contenant l'antigène spécifique de donovani de recombinaison de L. conjugué avec de l'or colloïdal (Leishmania conjugue) et des conjugués d'IgG-or de lapin, 2) bande de membrane de nitrocellulose d'a contenant une bande d'essai (bande de T) et une bande de contrôle (bande de C). La bande de T est enduite d'un préenduisage avec de l'antigène non-conjugué de donovani de L., et la bande de C est enduite d'un préenduisage avec de l'anticorps d'IgG d'anti-lapin de chèvre.

Quand à volume approprié de spécimen d'essai est distribué dans l'échantillon bien de la cassette d'essai, le spécimen émigre par l'action capillaire à travers la cassette.  Anti- donovani ab de L. si le présent dans le spécimen liera aux conjugués de Leishmania. L'immunocomplex est alors capturé sur la membrane par l'antigène enduit d'un préenduisage, formant un Bourgogne a coloré la bande de T, indiquant un résultat d'essai positif du donovani ab de L.

L'absence de la bande de T suggère un résultat négatif. L'essai contient un contrôle interne (bande de C) qui devrait montrer un Bourgogne a coloré la bande de l'immunocomplex du conjugué d'IgG-or d'IgG /rabbit d'anti-lapin de chèvre indépendamment du développement de couleur sur la bande de T. Autrement, le résultat d'essai est invalide et le spécimen doit être retesté avec un autre dispositif.

LES RÉACTIFS ET LES MATÉRIAUX ONT FOURNI

la poche de l'aluminium 1.Each contient avec trois articles à l'intérieur :

a. Un dispositif de cassette.

b. Un compte-gouttes en plastique.

c. Un déshydratant.

diluant 2.Sample

notice explicative 3.One (instruction pour l'usage).

MATÉRIAUX REQUIS ET DISPONIBLES POUR L'ACHAT

1.        Contrôle positif

2.        Contrôle négatif

MATÉRIAUX REQUIS MAIS NON FOURNIS

1.        Horloge ou minuterie

AVERTISSEMENTS ET PRÉCAUTIONS

·    Pour l'usage diagnostique in vitro professionnel seulement.

·    N'employez pas après que la date d'échéance ait indiqué sur le paquet. N'employez pas l'essai si sa poche d'aluminium est endommagée. Ne réutilisez pas les essais.

·    Ce kit contient des produits d'origine animale. La connaissance certifiée d'origine et/ou de l'état sanitaire des animaux ne garantit pas totalement l'absence des agents pathogènes transmissibles. Elle est, a recommandé donc que ces produits soient traités comme potentiellement infectieux, et manipulés en observant les mesures de sécurité habituelles (n'ingérez pas ou n'inhalez pas).

·    Évitez la contamination transversale des spécimens à l'aide d'un nouveau conteneur de collection de spécimen pour chaque spécimen obtenu.

·    Lisez la procédure entière soigneusement avant de réaliser tous les essais.

·    Ne mangez pas, ne buvez pas ou ne fumez pas dans le secteur où les spécimens et les kits sont manipulés. Manipulez tous les spécimens comme si ils contiennent des agents infectieux. Observe a établi des précautions contre des risques microbiologiques dans toute la procédure et suit les procédures standard pour la disposition appropriée des spécimens. Portez les vêtements de protection tels que des manteaux de laboratoire, des gants jetables et la protection oculaire quand on analyse des spécimens.

·    Salin protégé contient l'azoture de sodium qui peut réagir avec l'avance ou la tuyauterie de cuivre pour former les azotures potentiellement explosifs en métal. En se débarrassant des échantillons salins ou extraits protégés, toujours flux avec des quantités copieuses de l'eau pour empêcher l'accumulation d'azoture.

·    N'échangez pas ou ne mélangez pas les réactifs de différents sorts.

·    L'humidité et la température peuvent compromettre des résultats.

·    Les matériaux de essai utilisés devraient être jetés selon local, l'état et/ou les règlements fédéraux.

INSTRUCTIONS DE PRÉPARATION ET DE STOCKAGE DE RÉACTIF

Tous les réactifs sont prêts à employer comme fournis. Dispositifs inutilisés d'essai de magasin non-ouverts à 2°C-30°C.  Les contrôles positifs et négatifs devraient être maintenus à 2°C-8°C. Si stocké à 2°C-8°C, assurez-vous que le dispositif d'essai est apporté à la température ambiante avant l'ouverture. Le dispositif d'essai est stable par la date d'échéance imprimée sur la poche scellée. Ne gelez pas le kit ou n'exposez pas le kit au-dessus de 30°C.

COLLECTION ET MANIPULATION DE SPÉCIMEN

Considérez tous les matériaux d'origine humaine comme infectieux et manipulez-les suivant des procédures standard de sécurité biologique.

Plasma

1.             Rassemblez le spécimen de sang dans un tube supérieur de lavande, bleu ou vert de collection (contenant l'EDTA, le citrate ou l'héparine, respectivement dans Vacutainer®) par veinpuncture.

2.     Séparez le plasma par centrifugation.

3.     Retirez soigneusement le plasma dans le nouveau tube prémarqué.

Sérum

1.        Rassemblez le spécimen de sang dans un tube de collection d'agrostide blanche (ne contenant aucun anticoagulant dans Vacutainer®) par veinpuncture.

2.        Permettez au sang de coaguler.

3.        Séparez le sérum par centrifugation.

4.        Retirez soigneusement le sérum dans un nouveau tube prémarqué.

Sang

1.        Des gouttes du sang total peuvent être obtenues par l'un ou l'autre de piqûre ou de veinpuncture d'astuce de doigt. N'employez aucun sang hemolized pour l'essai.

2.

3.        Des spécimens de sang total devraient être stockés dans la réfrigération (2°C-8°C) sinon a examiné immédiatement. Les spécimens doivent être examinés d'ici 24 heures de la collection.

Spécimens d'essai dès que possible après le rassemblement. Les spécimens de magasin à 2°C-8°C sinon ont examiné immédiatement.

Spécimens de magasin à 2°C-8°C jusqu'à 5 jours. Les spécimens devraient être gelés à -20°C pour un entreposage plus prolongé.

Évitez les cycles gel-dégel multiples. Avant d'examiner, apportez les spécimens gelés à la température ambiante lentement et au mélange doucement. Des spécimens contenant les particules évidents devraient être clarifiés par centrifugation avant l'essai. N'employez pas les échantillons démontrant le lipemia brut, le hemolysis brut ou la turbidité afin d'éviter l'interférence sur l'interprétation de résultat.