Kit de test ELISA pour l'acide hyaluronique humain (HA)

Types d'échantillons validés:Sérum, plasma sanguin, salive, urine et autres liquides tissulaires connexes.

POUR USAGE RECHERCHE SEULEMENT. NE PAS UTILISER DANS LES PROCÉDURES DE DIAGNOSTIC.

Veuillez lire attentivement cette notice avant utilisation. Ce kit ELISA est basé sur le principe de la technique du sandwich double anticorps pour détecter l'acide hyaluronique (HA) humain. À utiliser uniquement à des fins de recherche, et non pour le diagnostic médical.

Utilisation prévue

Ce kit est utilisé pour doser l'acide hyaluronique (HA) dans l'échantillon de sérum, de plasma sanguin et d'autres liquides tissulaires connexes humains.

Principe du test

Le kit utilise un test immunoenzymatique (ELISA) en sandwich double anticorps pour doser le niveau d'acide hyaluronique (HA) humain dans les échantillons. Ajouter l'acide hyaluronique (HA) au puits d'anticorps monoclonaux enzymatiques qui est pré-enduit d'anticorps monoclonaux d'acide hyaluronique (HA) humain, incubation ; puis, ajouter des anticorps d'acide hyaluronique (HA) marqués à la biotine, et combiner avec la streptavidine-HRP pour former un complexe immun ; puis effectuer à nouveau une incubation et un lavage pour éliminer l'enzyme non combinée. Ensuite, ajouter la solution chromogène A, B, la couleur du liquide se transforme en bleu, et sous l'effet de l'acide, la couleur devient finalement jaune. La chroma de la couleur et la concentration de la substance humaine acide hyaluronique (HA) de l'échantillon étaient positivement corrélées.

Matériels fournis dans le kit de test

Matériels requis mais non fournis

1. Incubateur 37 ℃ 2. Lecteur d'enzymes standard

3. Pipettes de précision et pointes de pipette jetables 4. Eau distillée

5. Tubes jetables pour la dilution des échantillons 6. Papier absorbant

Note importantes

1. Après avoir été sorti de l'environnement 2-8℃, le kit doit être équilibré pendant 30 minutes à température ambiante avant utilisation. Si les plaques enduites d'enzyme n'ont pas été utilisées après ouverture, les plaques restantes doivent être conservées dans un sac scellé.

2. Pour chaque étape, ajouter l'échantillon avec un injecteur d'échantillon qui doit être calibré fréquemment, afin d'éviter des tolérances expérimentales inutiles.

3. L'opération doit être effectuée strictement conformément aux instructions. Et les résultats des tests doivent être basés sur les lectures du lecteur d'enzymes.

4. Afin d'éviter toute contamination croisée, il est interdit de réutiliser la tête d'aspiration et la membrane de la plaque de scellement dans vos mains.

5. Tous les échantillons, la solution de lavage et chaque type de rejet doivent être traités conformément au processus des matières infectieuses.

6. Les réactifs inutilisés doivent être rangés ou couverts. Ne pas utiliser de réactifs de lots différents. Et les utiliser avant la date d'expiration.

7. Le substrat B est sensible à la lumière. L'exposition prolongée à la lumière est interdite.

Méthode de lavage

Méthode de lavage manuelle :secouer le liquide restant dans les plaques enzymatiques ; placer des papiers buvard sur le banc d'essai et tapoter fortement les plaques à l'envers. Injecter au moins 0,35 ml de solution de lavage après dilution dans le puits et faire macérer pendant 1 à 2 minutes. Répéter ce processus selon vos besoins.

Méthode de lavage automatique :s'il existe une machine à laver automatique, elle ne doit être utilisée dans le test que si vous connaissez bien son fonctionnement et ses performances.

Précision

Précision intra-essai (précision au sein d'un essai) : 3 échantillons avec des niveaux bas, moyens et élevés d'HA humain ont été testés 20 fois sur une plaque, respectivement.

Précision inter-essai (précision entre les essais) : 3 échantillons avec des niveaux bas, moyens et élevés d'HA humain ont été testés sur 3 plaques différentes, 8 réplicats dans chaque plaque.

CV(%) = ÉT/moyenneX100

Intra-essai : CV<10%

Inter-essai : CV<12%

Exigences relatives aux spécimens

1. Impossible de détecter l'échantillon qui contient NaN3, car NaN3 inhibe l'activité HRP.

2. extraire dès que possible après le prélèvement de l'échantillon, et conformément à la littérature pertinente, et doit être expérimenté dès que possible après l'extraction. Si ce n'est pas possible, l'échantillon peut être conservé à -20 ℃ pour la conservation, éviter les cycles répétés de congélation-décongélation.

3. sérum - coagulation à température ambiante 10-20 minutes, centrifugation 20 minutes à la vitesse de 2000-3000 tr/min. retirer le surnageant, si une précipitation apparaît, centrifuger à nouveau.

4. plasma - utiliser du plasma EDTA ou citrate approprié comme anticoagulant, mélanger 10-20 minutes, centrifugation 20 minutes à la vitesse de 2000-3000 tr/min. retirer le surnageant, si une précipitation apparaît, centrifuger à nouveau.

5. Urine - prélever dans un récipient stérile, centrifugation 20 minutes à la vitesse de 2000-3000 tr/min. retirer le surnageant, si une précipitation apparaît, centrifuger à nouveau. L'opération d'hydrothorax et de liquide céphalorachidien s'y réfère.

6. surnageant de culture cellulaire - détecter les composants sécrétoires, prélever dans un récipient stérile, centrifugation 20 minutes à la vitesse de 2000-3000 tr/min. retirer le surnageant, détecter la composition des cellules, diluer la suspension cellulaire avec du PBS (PH7,2-7,4), la concentration cellulaire a atteint 1 million/ml, cycles répétés de congélation-décongélation, endommager les cellules et libérer les composants intracellulaires, centrifugation 20 minutes à la vitesse de 2000-3000 tr/min. retirer le surnageant, si une précipitation apparaît, centrifuger à nouveau.

7. Échantillons de tissus - Après avoir coupé les échantillons, vérifier le poids, ajouter du PBS (PH7,2-7,4), congeler rapidement avec de l'azote liquide, maintenir les échantillons à 2-8℃ après la fusion, ajouter du PBS (PH7,4), homogénéiser à la main ou avec des broyeurs, centrifugation 20 minutes à la vitesse de 2000-3000 tr/min. retirer le surnageant.