Kit de test ELISA pour l'alanine aminotransférase (ALT) chez le rat

Utilisation prévue

Ce kit est utilisé pour doser l'alanine aminotransférase (ALT) dans l'échantillon de sérum, de plasma sanguin et d'autres liquides tissulaires connexes de rat.

Principe du test

Le kit utilise un test immunoenzymatique (ELISA) en sandwich à double anticorps pour doser le taux d'alanine aminotransférase (ALT) de rat dans les échantillons. Ajouter l'alanine aminotransférase (ALT) au puits d'anticorps monoclonal enzymatique pré-enduit d'anticorps monoclonal anti-alanine aminotransférase (ALT) de rat, incubation ; ensuite, ajouter des anticorps anti-alanine aminotransférase (ALT) marqués à la biotine et combinés à de la streptavidine-HRP pour former un complexe immun ; ensuite, effectuer à nouveau une incubation et un lavage pour éliminer l'enzyme non combinée. Ensuite, ajouter la solution chromogène A, B, la couleur du liquide vire au bleu, et sous l'effet de l'acide, la couleur devient finalement jaune. La chroma de la couleur et la concentration de la substance alanine aminotransférase (ALT) de rat de l'échantillon étaient positivement corrélées.

Matériels fournis dans le kit de test

Matériels requis mais non fournis

1. Incubateur 37 °C 2. Lecteur d'enzymes standard

3. Pipettes de précision et pointes de pipette jetables 4. Eau distillée

5. Tubes jetables pour la dilution des échantillons 6. Papier absorbant

Notes importantes

1. Après avoir été sorti de l'environnement 2-8 °C, le kit doit être équilibré pendant 30 minutes à température ambiante avant utilisation. Si les plaques enduites d'enzyme n'ont pas été utilisées après ouverture, les plaques restantes doivent être conservées dans un sac scellé.

2. Pour chaque étape, ajouter l'échantillon avec un injecteur d'échantillon qui doit être calibré fréquemment, afin d'éviter des tolérances expérimentales inutiles.

3. L'opération doit être effectuée strictement conformément aux instructions. Et les résultats des tests doivent être basés sur les lectures du lecteur d'enzymes.

4. Afin d'éviter toute contamination croisée, il est interdit de réutiliser la tête d'aspiration et la membrane de la plaque de scellement.

5. Tous les échantillons, la solution de lavage et chaque type de rejet doivent être traités conformément au processus des matières infectieuses.

6. Les réactifs inutilisés doivent être rangés ou recouverts. Ne pas utiliser de réactifs de différents lots. Et les utiliser avant la date d'expiration.

7. Le substrat B est sensible à la lumière. L'exposition prolongée à la lumière est interdite.

Méthode de lavage

Méthode de lavage manuelle : secouer le liquide restant dans les plaques enzymatiques ; placer des papiers buvard sur le banc d'essai et tapoter fortement les plaques à l'envers. Injecter au moins 0,35 ml de solution de lavage après dilution dans le puits et faire macérer pendant 1 à 2 minutes. Répéter ce processus selon vos besoins.

Méthode de lavage automatique : s'il existe une machine à laver automatique, elle ne doit être utilisée lors du test que si vous connaissez bien sa fonction et ses performances.

Précision

Précision intra-essai (précision au sein d'un essai) : 3 échantillons avec des taux faibles, moyens et élevés d'ALT de rat ont été testés 20 fois sur une plaque, respectivement.

Précision inter-essai (précision entre les essais) : 3 échantillons avec des taux faibles, moyens et élevés d'ALT de rat ont été testés sur 3 plaques différentes, 8 réplicats dans chaque plaque.

CV (%) = ÉT/moyenneX100

Intra-essai : CV<10 %

Inter-essai : CV<12 %

Exigences relatives aux spécimens

1. Impossible de détecter l'échantillon qui contient NaN3, car NaN3 inhibe l'activité de la HRP.

2. extraire dès que possible après le prélèvement de l'échantillon, et conformément à la littérature pertinente, et doit être expérimenté dès que possible après l'extraction. Si ce n'est pas possible, l'échantillon peut être conservé à -20 °C pour la conservation, éviter les cycles répétés de congélation-décongélation.

3. sérum - coagulation à température ambiante 10-20 minutes, centrifugation 20 minutes à la vitesse de 2000-3000 tr/min. retirer le surnageant, si une précipitation apparaît, centrifuger à nouveau.

4. plasma - utiliser du plasma EDTA ou citrate adapté comme anticoagulant, mélanger 10-20 minutes, centrifugation 20 minutes à la vitesse de 2000-3000 tr/min. retirer le surnageant, si une précipitation apparaît, centrifuger à nouveau.

5. Urine - prélever à l'aide d'un récipient stérile, centrifugation 20 minutes à la vitesse de 2000-3000 tr/min. retirer le surnageant, si une précipitation apparaît, centrifuger à nouveau. L'opération d'hydrothorax et de liquide céphalorachidien s'y réfère.

6. surnageant de culture cellulaire - détecter les composants sécrétoires, prélever à l'aide d'un récipient stérile, centrifugation 20 minutes à la vitesse de 2000-3000 tr/min. retirer le surnageant, détecter la composition des cellules, diluer la suspension cellulaire avec du PBS (PH7,2-7,4), la concentration cellulaire a atteint 1 million/ml, cycles répétés de congélation-décongélation, endommager les cellules et libérer les composants intracellulaires, centrifugation 20 minutes à la vitesse de 2000-3000 tr/min. retirer le surnageant, si une précipitation apparaît, centrifuger à nouveau.

7. Échantillons de tissus - Après avoir coupé les échantillons, vérifier le poids, ajouter du PBS (PH7,2-7,4), congeler rapidement avec de l'azote liquide, maintenir les échantillons à 2-8 °C après la fusion, ajouter du PBS (PH7,4), homogénéiser à la main ou avec des broyeurs, centrifugation 20 minutes à la vitesse de 2000-3000 tr/min. retirer le surnageant.