Sécurité alimentaire de kit de Clenbuterol Elisa

Sécurité alimentaire de kit de Clenbuterol Elisa

UTILISATION D'INTENTED

Clenbuterol ELISA Kit est une analyse enzyme-liée directe d'immunosorbant pour le quantitatif détectent la présence de Clenbuterol dans les échantillons de tissu animal, d'urine et d'alimentation.

Sensibilité : 0,05 ppb

Limite de détection : Ppb du tissu animal 0,2/0,05 ppb

Urine 0,05 ppb

Alimentez à 2,5 le ppb

Taux de récupération : ± 15% (foie de porc, alimentation 80%±15%) de 90%

COMPOSANT DE KIT

• 1 plat de microtitre de X (8 bandes démontables de X12 de microwells)
• 6 solutions étalons de X (1 ml chacun) : 0 NG ml, 0,05 NG ml, 0,15 NG ml, 0,45 NG ml, 0,9 NG ml, 1,8 NG ml
• 1 anticorps de X Clenbuterol (6 ml)
• 1 X HRP a conjugué l'anticorps (6 ml)
• 1 tampon de dilution d'échantillon de X (30 ml)
• 1 concentré de tampon de lavage de X (10 X, 50 ml)
• 1 substrat A (6 ml) de X
• 1 substrat B (6 ml) de X
• 1 X arrêtant la solution (6 ml)
• 1 manuel de produit de X
• MATÉRIAUX REQUIS MAIS NON FOURNIS
• Lecteur de plat d'ELISA Microtiter équipé de 450 filtres de nanomètre

- micropipette multicanale de 50 – 200 μL

- micropipette de précision de 50, 100 et 200 μL

- Joint de Microplate ou bouteille de compression

- Homogénisateur

- Centrifugeuse

- Tubes centrifuges

- Eau distillée

- HCL, NaOH

PRÉPARATION DES SOLUTIONS DE FONCTIONNEMENT

Tampon de lavage : concentré 10X dilué avec de l'eau distillée (c.-à-d. 1 ml + 9 ml).

NaCl de 2% : dissolvez NaCl 2.0±0.01 avec 100 ml d'eau distillée dans un becher

0.1M HCl : diluez l'acide chlorhydrique concentré par 8.33mL avec de l'eau distillée et faites le volume constant à 1 L, OU 10X dilué 1M HCl avec de l'eau distillée (c.-à-d. 1 ml + 9 ml).

Solution d'extrait de tissu animal : solution de NaCl du mélange 2% avec 0.1M HCl au rapport volumétrique 4 : 1.

La solution étalon, conjugué Enzyme-lié, le substrat A, le substrat B et la solution d'arrêt sont prête à employer.

1. PRÉPARATION TÉMOIN
   1. Urine (facteur de dilution 1)

• Prenez à 50 le μL de l'échantillon d'urine clair directement pour l'analyse. (Si l'échantillon d'urine est trouble, svp filtrez-ou centrifugez-le pour se dégager, et employez le surnageant.) Faites la dilution par l'eau distillée avant analyse si la concentration de Clenbuterol est haute.
• Tissu animal/foie

Méthode 1 (facteur de dilution : 4) :

• Homogénéisez l'échantillon (exempt de la graisse) pour 1 minute à 10 000 r/min.
• Pesez 1.0±0.01g d'homogénat dans un tube centrifuge de 15 ml. Si le tissu animal, ajoutent svp 3 ml de solution et de mélange d'extrait bien ; si le foie, ajoutent svp 3 ml 0.1M HCl, secousse pendant pendant 5 mn.
• Faites une centrifugation à 5000 t/mn au °C 20-25 pendant 5 mn.
• Prenez 1 ml de surnageant et le mélanger à du polystyrène 2mL à un tube à centrifuger, puis ajoutez 15μL de NaOH de 1M et de mélange bien. Ajustez la valeur du pH sur 7 – 8.
• Prenez le liquide de 50 μL de la phase de l'eau pour l'analyse.

Méthode 2 (facteur de dilution : 1) :

• Homogénéisez l'échantillon (exempt de la graisse) pour 1 minute à 10 000 r/min.
• Pesez 2.0±0.01g d'homogénat dans un tube centrifuge de 15 ml. Ajoutez 6 ml d'alcool méthylique et de secousse pendant 5 mn.
• Faites une centrifugation à 5000 t/mn pendant 5 mn.
• Prenez 1,5 ml de surnageant (couche d'alcool méthylique) dans un tube de verre et séchez-les par le °C 50 du débit d'azote.
• Dissolvez totalement le résidu par 0,5 ml de tampon de dilution d'échantillon, puis ajoutez 0,5 ml de n-hexane. Secousse à mélanger bien.
• Débarassez-vous de la couche supérieure et prenez le liquide de 50 μL pour l'analyse.
  1. Alimentation (facteur 50 de dilution)
• Pesez 2.0±0.01g d'échantillon pulvérisé d'alimentation dans un tube centrifuge de 50 ml. Additionnez 2 ml de 1M HCl et 16 ml d'eau distillée. Secousse à mélanger bien.
• Faites une centrifugation à 5000 t/mn pour la minute 5 à la température ambiante.
• Prenez à 200 le μL du surnageant à un tube centrifuge de 1,5 ml et mélangez bien au μL 800 du tampon de dilution d'échantillon.
• Ajustez la valeur du pH sur 7.0-8.0 par 15 le NaOH de l'UL 1M.
• Prenez l'UL 50 pour l'analyse.