Lipocalin gélatinase-associé de neutrophile humaine (NGAL) ELISA Kit

Lipocalin gélatinase-associé de neutrophile humaine (NGAL) ELISA Kit

LES TYPES TÉMOIN ONT VALIDÉ

Sérum, plasma sanguin, salive, urine, et tout autre liquide relatif de tissu.

Veuillez lire cette insertion complètement avant d'employer le produit.

POUR L'USAGE DE RECHERCHES SEULEMENT. PAS POUR L'USAGE DES PROCÉDURES DE DIAGNOSTIC.

Svp soigneusement lire cette instruction avant utilisation. Ce kit d'ELISA est basé sur le principe de la technique de sandwich à double-anticorps pour détecter le lipocalin gélatinase-associé de neutrophile humaine (NGAL). Soyez employé seulement pour des recherches, pour ne pas être employé pour le diagnostic médical.

UTILISATION PRÉVUE

Ce kit est employé pour analyser le lipocalin gélatinase-associé de neutrophile (NGAL) dans l'échantillon du sérum de l'humain, du plasma sanguin, et de tout autre liquide relatif de tissu.

PRINCIPE

Le kit emploie une analyse d'immunosorbant enzyme-liée par sandwich de double-anticorps (ELISA) pour analyser le niveau du lipocalin gélatinase-associé de neutrophile humaine (NGAL) dans les échantillons. Ajoutez le lipocalin gélatinase-associé de neutrophile (NGAL) à l'enzyme d'anticorps monoclonal bien qui est enduite d'un préenduisage avec de l'anticorps monoclonal gélatinase-associé du lipocalin de neutrophile humaine (NGAL), incubation ; puis, ajoutez les anticorps gélatinase-associés du lipocalin de neutrophile (NGAL) marqués avec de la biotine, et combinés avec Streptavidin-HRP pour former le complexe immun ; effectuez alors l'incubation et le lavage encore pour éliminer l'enzyme non liée. Ajoutez alors la solution A, B, la couleur de chromogène des changements liquides dans le bleu, et à l'effet de l'acide, la couleur devient finalement jaune. Le chroma de couleur et la concentration du lipocalin gélatinase-associé de neutrophile humaine de substance (NGAL) de l'échantillon ont été franchement corrélés.

Matériaux assurés dans le kit d'essai

Matériaux requis mais non assurés

1. 37 lecteur d'enzymes de norme de l'incubateur 2. de ℃

3. Pipettes de précision et eau distillée jetable des astuces 4. de pipette

5. Tubes jetables pour le papier d'absorbant de la dilution 6. d'échantillon

Notes importantes

1. Beening sorti de l'environnement 2-8℃, le kit devrait être équilibré 30 minutes dans la température ambiante emploient alors. Si les plats enduits de l'enzyme n'ont pas été utilisés après ouvert, les plats restants devraient être stockés dans le sac scellé.

2. Pour chaque étape, ajoutez l'échantillon avec l'injecteur témoin qui devrait être calibré fréquemment, afin d'éviter la tolérance expérimentale inutile.

3. il opération sera accord effectué aux instructions strictement. Et des résultats d'essai doivent être basés sur les lectures du lecteur d'enzymes.

4. Afin d'éviter la contamination transversale, on l'interdit de réutiliser la membrane de plat de tête et de joint d'aspiration dans des vos mains.

5. Tout l'échantillons, tampon de lavage et chaque genre de rejet devraient selon le processus matériel contagieux.

6. Les agents oisifs seront mis ou couverts. N'employez pas le réactif avec différents groupes. Et employez-les avant date expirée.

7. Le substrat B est sensible à la lumière. On interdit l'exposition prolongée à la lumière.

Méthode de lavage

Méthode manuellement de lavage : secouez loin restent liquides dans les plats d'enzymes ; placez quelques papiers adonnés à la boisson sur le banc d'essai, et agitez les plats sur le à l'envers fortement. Injectez au moins la solution de lavage de l'après-dilution 0.35ml dans le puits, et marinez 1~2 minutes. Répétez ce processus selon vos conditions.

Méthode de lavage automatique : s'il y a machine à laver automatique, elle devrait seulement être employée dans l'essai quand vous êtes tout à fait au courant de sa fonction et représentation.

Précision

précision d'Intra-analyse (précision dans une analyse) : 3 échantillons avec bas, moyen et de haut niveau NGAL humain ont été examinés 20 fois d'un plat, respectivement.

précision d'Inter-analyse (précision entre les analyses) : 3 échantillons avec bas, moyen et de haut niveau NGAL humain ont été examinés de 3 plats différents, 8 répliques dans chaque plat.

Cv (%) = SD/meanX100

Intra-analyse : Cv<10>

Inter-analyse : Cv<12>

Conditions de spécimen

1. Ne peut pas détecter l'échantillon qui contiennent NaN3, parce que NaN3 empêche HRP actif.

2. extrayez dès que possible après collection de spécimen, et selon la littérature appropriée, et devriez être expérience dès que possible après l'extraction. Si elle ne peut pas, le spécimen peut être maintenu dans le ℃ -20 pour préserver, Avoid a répété les cycles gel-dégel.

3. la coagulation de sérum à la température ambiante 10-20 minutes, minute de la centrifugation 20 à la vitesse de t/mn 2000-3000 enlèvent le surnageant, si la précipitation apparaissait, centrifugeur encore.

4.plasma-use a adapté à l'EDTA ou le plasma de citrate comme anticoagulant, mélange 10-20 minutes, minute de la centrifugation 20 à la vitesse de t/mn 2000-3000 enlèvent le surnageant, si la précipitation apparaissait, centrifugeur encore.

5. Urine-rassemblez pour poursuivre un conteneur stérile, la centrifugation 20 que la minute à la vitesse de t/mn 2000-3000 enlèvent le surnageant, si la précipitation apparaissait, centrifugeur encore. L'ofHydrothorax d'opération et la référence de fluide céphalo-rachidien à elle.

la culture 6.cell surnageant-détecter les composants sécréteurs, se rassembler pour poursuivre un conteneur stérile, minute de la centrifugation 20 à la vitesse de t/mn 2000-3000 pour enlever le surnageant, détecter la composition des cellules, suspension de cellules de Dilut avec PBS (PH7.2-7.4), concentration en cellules a atteint 1 million/ml, cycles gel-dégel répétés, cellules de dommages et la libération des composants intracellulaires, minute de la centrifugation 20 à la vitesse de t/mn 2000-3000 enlèvent le surnageant, si la précipitation apparaissait, centrifugeur encore.

7.Tissue prélève après coupure des échantillons, vérifie le poids, ajoute PBS (PH7.2-7.4), rapidement congelé avec de l'azote liquide, maintient des échantillons à 2-8℃ après fonte, ajoute PBS (PH7.4), homogénéisé à la main ou les broyeurs, minute de la centrifugation 20 à la vitesse de t/mn 2000-3000 enlèvent le surnageant.

Procédure d'analyse

dilution 1.Standard : (ce kit d'essai fournira un réactif standard original, le diluent svp par vous-même selon l'instruction.)

16ng/ml         8ng/ml       4ng/ml      2ng/ml    1ng/ml    0.5ng/ml

la quantité 2.The des plats dépend des quantités d'échantillons à-être-examinés et des normes. On lui suggère de reproduire chaque norme et blanc bien. Chaque échantillon sera fait selon votre quantité exigée, et essaye d'employer le puits reproduit comme possible.

échantillons 3.Inject :① Blanc bien : n'ajoutez pas les échantillons et le NGAL-anticorps marqués avec de la biotine, le Streptavidin-HRP, seulement la solution A et B de chromogène, et arrêtez la solution sont laissés ; d'autres opérations sont identiques. Puits standard de ② : ajoutez 50μl standard, Streptavidin-HRP 50μl (puisque la norme a déjà combiné l'anticorps de biotine, il n'est pas nécessaire d'ajouter l'anticorps) ; ③ à être puits d'essai : ajoutez l'échantillon 40μl, et puis ajoutez le NGAL-anticorps 10μl et le Streptavidin-HRP 50μl. Puis joint le memberance de scellage, et doucement secousse, incubée 60 minutes au ℃ 37.

4.Confection : diluez 30 fois le concentré 30×washing avec de l'eau distillée comme remplaçant.

5. Lavage : enlevez le memberance soigneusement, et vidangez le liquide, secouez loin l'eau restante.

6. Ajoutez la solution de chromogène un 50μl, puis la solution de chromogène B 50μl à chaque puits. Doucement mélangé, incubez pour la minute 10 à 37℃ à partir de lumière.

7. Arrêt : Ajoutez la solution 50μl d'arrêt dans chaque puits pour arrêter la réaction (les changements bleus dans le jaune immédiatement).

8. Mesure finale : Prenez le blanc bien en tant que zéro, mesure le densit optique (OD) au-dessous de la longueur d'onde de 450 nanomètre qui devrait être effectuée dans 15min après avoir ajouté la solution d'arrêt.

9. Selon la concentration des normes et les valeurs correspondantes d'OD, calculez l'équation linéaire de courbe standard, et appliquez alors les valeurs d'OD de l'échantillon sur l'équation de régression pour calculer la concentration de l'échantillon correspondant. Il est acceptable d'employer des genres de logiciel pour effectuer des calculs.