Lipocalin gélatinase-associé de neutrophile humaine (NGAL) ELISA Kit

Lipocaline associée à la gélatinase neutrophile humaine (NGAL)

TYPES d'échantillons validés

Serum, plasma sanguin, salive, urine et autres tissus connexes.

Veuillez lire attentivement la notice avant d' utiliser le produit.

À des fins de recherche uniquement, non à des fins de diagnostic.

Le kit ELISA est basé sur le principe de la technique sandwich à double anticorps pour détecter la lipocaline associée à la gélatinase neutrophile humaine ((NGAL).Utiliser uniquement à des fins de rechercheNe pas utiliser pour un diagnostic médical.

Utilisation prévue

Ce kit est utilisé pour évaluer la lipocaline (NGAL) associée à la gélatinase neutrophile dans l' échantillon de sérum humain, de plasma sanguin et d' autres tissus connexes.

Principe

Le kit utilise un test d'immunosorbent lié à l'enzyme (ELISA) à double anticorps sandwich pour évaluer le niveau de lipocaline (NGAL) associée à la gélatinase neutrophile humaine dans les échantillons.Ajouter de la lipocaline associée à la neutrophile gélatinase (NGAL) à un puits d'anticorps monoclonaux de l'enzyme pré-enduit d'anticorps monoclonaux associés à la gélatinase neutrophile humaine (NGAL), l' incubation; ensuite, ajouter des anticorps lipocaline (NGAL) associés à la gélatinase neutrophile étiquetés avec de la biotine, et combinés avec la streptavidine-HRP pour former un complexe immunitaire;ensuite effectuer l'incubation et le lavage à nouveau pour enlever l'enzyme non combinéePuis ajouter la solution de chromogène A, B, la couleur du liquide change en bleu, et à l'effet de l'acide, la couleur devient enfin jaune.Le chromat de couleur et la concentration de lipocaline (NGAL) associée à la gélatinase neutrophile de l'échantillon étaient positivement corrélés..

Matériaux fournis dans le kit d'essai

Matériaux requis mais non fournis

1. incubateur à 37 °C 2. lecteur d'enzyme standard

3- Pipettes de précision et tuyaux jetables 4.

5- Tubes jetables pour la dilution des échantillons 6.

Notes importantes

1Si les plaques enduites d'Enzyme n'ont pas été utilisées après ouverture, la batterie doit être placée dans un endroit où la température ambiante n'est pas suffisante.les autres plaques doivent être conservées dans un sac scellé.

2Pour chaque étape, ajouter l'échantillon avec l'injecteur d'échantillon qui doit être calibré fréquemment, afin d'éviter des tolérances expérimentales inutiles.

3. l'opération doit être effectuée conformément aux instructions strictement et les résultats des essais doivent être basés sur les relevés du lecteur d'enzymes.

4Pour éviter la contamination croisée, il est interdit de réutiliser la tête d'aspiration et la membrane de la plaque d'étanchéité dans vos mains.

5. Tous les échantillons, le tampon de lavage et chaque type de rejet doivent être selon le procédé du matériau infectieux.

6. Les agents inactifs doivent être placés ou recouverts. Ne pas utiliser le réactif avec des lots différents. Et les utiliser avant la date de péremption.

7Le substrat B est sensible à la lumière, une exposition prolongée à la lumière est interdite.

Méthode de lavage

Méthode de lavage manuel:secouez le liquide restant dans les plaques enzymatiques, placez des feuilles de papier sur le banc d'essai et battez fortement les plaques à l'envers.35 ml de solution de lavage après dilution dans le puitsRépétez ce processus selon vos besoins.

Méthode de lavage automatique:s'il existe une machine à laver automatique, elle ne doit être utilisée dans l'essai que si vous connaissez bien sa fonction et ses performances.

Précision

Précision dans l'essai: 3 échantillons présentant un niveau faible, moyen et élevé de NGAL humain ont été testés 20 fois sur une plaque, respectivement.

Précision entre les essais: 3 échantillons présentant un niveau faible, moyen et élevé de NGAL humain ont été testés sur 3 plaques différentes, 8 réplications dans chaque plaque.

CV ((%) = SD/moyenneX100

Le taux de dépistage de la maladie est supérieur à 10%.

Inter-analyse: CV< 12%

Exigences relatives aux échantillons

1. Impossible de détecter l'échantillon contenant du NaN3, car le NaN3 inhibe l'activité du HRP.

2. extraire le plus tôt possible après la collecte des spécimens et selon la littérature pertinente, et doit être expérimenté le plus tôt possible après l'extraction.l'échantillon peut être conservé à -20 °C pour préserverÉvitez les cycles de congélation et de décongélation répétés.

3. sérum- coagulation à température ambiante 10-20 min, centrifugation 20 min à la vitesse de 2000-3000 tours/min. éliminer le supernatant, si des précipitations sont apparues, centrifugez à nouveau.

4- utilisation plasmatique appropriée EDTA ou plasma citrate comme anticoagulant, mélangez pendant 10 à 20 min, centrifugez pendant 20 min à une vitesse de 2000 à 3000 tr/min.

5. collecte d'urine dans un récipient stérile, centrifugation 20 min à la vitesse de 2000-3000 r.p.m. enlever le surnaturant, si des précipitations sont apparues, centrifugez à nouveau.L'opération de l'hydrothorax et du liquide céphalo-rachidien.

6- culture cellulaire - détection des composants sécrétoires, collecte dans un récipient stérile, centrifugation 20 min à une vitesse de 2000 à 3000 tr/min.Suspension de cellule diluée avec PBS (PH7).2-7.4), la concentration cellulaire atteint 1 million / ml, cycles de congélation-dégel répétés, dommages aux cellules et libération de composants intracellulaires, centrifugation 20 min à une vitesse de 2000-3000 tr/min.éliminer le surnaturantSi des précipitations apparaissent, centrifugez à nouveau.

7.échantillons de tissus- Après coupure des échantillons, vérifier le poids, ajouter du PBS ((PH7.2-7.4), congeler rapidement avec de l'azote liquide, maintenir les échantillons à 2-8°C après fusion, ajouter du PBS ((PH7.4),Homogénéisés à la main ou à la meuleuse, centrifugez pendant 20 min à une vitesse de 2000-3000 tr/h pour enlever le surnaturant.

Procédure d'évaluation

1.Dilution standard: (ce kit d'essai fournit un réactif standard d'origine, veuillez le diluer vous-même selon les instructions.)

16ng/ml 8ng/ml 4ng/ml 2ng/ml 1ng/ml 0,5ng/ml

2La quantité de plaques dépend de la quantité d'échantillons à tester et des normes.Chaque échantillon doit être réalisé en fonction de la quantité demandée., et essayez d'utiliser le double aussi bien que possible.

3.Échantillons à injecter: 1 puits vide:n'ajoutez pas de samples etL'Agence nationale de la santé- des anticorpsLes autres opérations sont les mêmes.2 Puits standard: ajouter 50 μl standard,Streptavidine-HRP 50μl (puisque la norme contient déjà des anticorps combinés à la biotine, il n'est pas nécessaire d'ajouter l'anticorps);3 Pour être des puits d'essai: ajouter un échantillon de 40 μl, etPuis ajoutezles deuxL'Agence nationale de la santé- anticorps 10 μlPuis sceller la membrane d'étanchéité et secouer doucement, incubé pendant 60 minutes à 37 °C.

4.Confection: diluer 30 fois le concentré de lavage 30 fois avec de l'eau distillée en attente.

5Laver: retirer soigneusement la membrane et vider le liquide, secouer l'eau restante.

6. Ajouter à chaque puits une solution de chromogène A 50 μl, puis une solution de chromogène B 50 μl. Mélanger doucement, incuber pendant 10 min à 37 °C à l'abri de la lumière.

7. Arrêt: Ajouter 50 μl de solution d'arrêt dans chaque puits pour arrêter la réaction (le bleu change immédiatement en jaune).

8Mesure finale: Prenez le puits vide à zéro, mesurez la densité optique (OD) sous une longueur d'onde de 450 nm, ce qui doit être effectué dans les 15 min après l'ajout de la solution de stop.

9. Selon les normes de concentration et les valeurs OD correspondantes, calculer l'équation de régression linéaire de la courbe standard,puis appliquer les valeurs OD de l'échantillon à l'équation de régression pour calculer la concentration de l'échantillon correspondantIl est acceptable d'utiliser des logiciels pour effectuer des calculs.