Kit de test ELISA pour le peptide lié au gène de la calcitonine humaine (CGRP)

Utilisation prévue

Ce kit est utilisé pour évaluer le peptide lié au gène de la calcitonine ((CGRP) dans l'échantillon de sérum, de plasma sanguin et d'autres liquides biologiques connexes de l'homme.

Principe de l'essai

Ce kit utilise un test d' immunosorbant lié à l' enzyme (ELISA) basé sur la technologie du sandwich à double anticorps de la biotine pour évaluer le peptide lié au gène de la calcitonine humaine (CGRP).Ajouter le peptide lié au gène de la calcitonine ((CGRP) aux puits, qui sont pré-enduits d'un anticorps monoclonal lié au gène de la calcitonine (CGRP) puis incubés, après quoi on ajoute des anticorps anti-CGRP étiquetés avec de la biotine pour s'unir à la streptavidine-HRP,qui forme un complexe immunitaire. Retirez les enzymes non liées après l'incubation et le lavage. Ajoutez les substrats A et B. Ensuite, la solution deviendra bleue et jaune sous l'effet de l'acide.Les nuances de solution et la concentration du peptide lié au gène de la calcitonine humaine (CGRP) sont positivement corrélées..

Matériaux fournis dans le kit de test

Matériaux requis mais non fournis

1. incubateur à 37 °C 2. lecteur d'enzyme standard

3- Pipettes de précision et tuyaux jetables 4.

5- Tubes jetables pour la dilution des échantillons 6.

Notes importantes

1. Avant d'ouvrir le kit conservé à une température de 2-8°C, il faut au moins 30 minutes pour qu'il atteigne naturellement la température ambiante.certaines des bandes utilisées doivent être conservées dans un sac hermétique.

2Lors de l'ajout des échantillons, l'injecteur d'échantillon doit être utilisé à chaque fois et sa précision doit également être vérifiée fréquemment pour éviter toute erreur individuelle.

3L'instruction doit être strictement suivie, tandis que la lecture du lecteur ELISA doit être définie comme norme pour déterminer le résultat de l'expérience.

4Les extrémités de la pipette et la membrane de la plaque d'étanchéité à la main ne doivent pas être utilisées plus d'une fois afin d'éviter une contamination croisée.

5.Tous les échantillons, les concentrations de lavage et les déchets de toutes sortes doivent être éliminés comme agents infectieux.

6Les autres réactifs non nécessaires doivent être emballés ou recouverts. Les réactifs de lots différents ne doivent pas être mélangés et doivent être utilisés avant leur date de validité respective.

7Le substrat B est sensible à la lumière et ne doit donc pas être exposé à la lumière trop longtemps.

Méthode de lavage

Méthode de lavage manuel:Laver à la main: secouer les liquides dans les trous de la plaque ELISA; poser plusieurs feuilles de papier sur le banc d'essai et tapoter fortement la plaque ELISA plusieurs fois vers le bas; puis injecter au moins 0.35 ml de concentration diluée pour le lavage pendant 1-2 minutes de trempageRépétez ce processus au besoin.

Méthode de lavage automatique:Le lavage par lave-vaisselle automatique: s'il existe un lave-vaisselle automatique, il ne doit être utilisé que lorsque vous connaissez bien ses fonctions.

Précision

Précision à l'intérieur de l'essai: 3 échantillons présentant des taux de CGRP humain faibles, moyens et élevés ont été testés 20 fois sur une plaque, respectivement.

Précision entre les essais: 3 échantillons présentant des taux de CGRP humain bas, moyens et élevés ont été testés sur 3 plaques différentes, 8 réplications dans chaque plaque.

CV ((%) = SD/moyenneX100

Le taux de dépistage de la maladie est supérieur à 10%.

Inter-analyse: CV< 12%

Exigences relatives aux échantillons

1.Les échantillons contenant du NaN3 ne doivent pas être testés car ils inhibent l'activité de la peroxydase du radis de cheval (HRP).

2Après la collecte de l'échantillon, l'extraction doit être effectuée immédiatement conformément aux documents correspondants. Après l'extraction, l'expérience doit également être réalisée immédiatement.conserver l'échantillon à -20°CÉvitez les cycles de congélation et de dégel répétés.

3.Sérum: laisser le sérum coaguler pendant 10 à 20 minutes à température ambiante. Centrifugez (à 2000 à 3000 tr/min) pendant 20 minutes.La centrifugation doit être effectuée à nouveau..

4.Plasma sanguin: conformément aux exigences de la collecte d'échantillons, l'EDTA ou le citrate de sodium doivent être utilisés comme anticoagulants.Centrifugeuse (à 2000-3000 tr/min) pendant environ 20 minutesLorsque des sédiments se sont produits pendant le stockage, la centrifugation doit être effectuée à nouveau.

5.Urine: collecte par tube stérile. Centrifugez (à 2000-3000 tr/min) pendant environ 20 minutes. Collectez soigneusement les surnaturants.La centrifugation doit être effectuée à nouveau.. Lors du prélèvement du liquide pleuropéritonéal et du liquide céphalo-rachidien, veuillez suivre les procédures mentionnées ci-dessus.

6.Supernatant de culture cellulaire: collecte par tubes stériles lors de l'examen des composants sécrétés. Centrifugez (à 2000-3000 tr/min) pendant environ 20 minutes. Collectez les supernatants avec soin.Lors de l'examen des composants de la cellule, utiliser du PBS (PH 7.2-7.4) pour diluer la suspension cellulaire à une concentration cellulaire d'environ 1 million/ml.Centrifugeuse (à 2000-3000 tr/min) pendant environ 20 minutesLorsque des sédiments se sont produits pendant le stockage, la centrifugation doit être effectuée à nouveau.

7.Échantillon de tissu: inciser l'échantillon et peser. Ajouter une certaine quantité de PBS (PH 7,4). Congeler immédiatement avec de l'azote liquide pour une utilisation ultérieure. Dégeler l'échantillon et le conserver à 2-8°C.Ajouter une certaine quantité de PBS (PH 7.4) puis homogénéiser l'échantillon à fond à la main ou par homogénéiseur. Centrifugez (à 2000-3000 tr/min) pendant environ 20 minutes. Ramassez soigneusement les surnaturants.Aliquot et conserver une pour examen et congeler les autres pour une utilisation ultérieure.