Anticorps humain de gondii de toxoplasme (Toxo-ab) ELISA Kit

Toxoplasme gondii chez l'homme Anticorps(Toxo-Ab) Équipement ELISA
 
 
Dans le sérum, le plasma, les milieux de culture ou tout fluide biologique.
 
À des fins de recherche uniquement!
Ne pas utiliser à des fins thérapeutiques ou diagnostiques.
S'il vous plaît, lisez toute la procédure avant de commencer!
À des fins de recherche uniquement
Objectif
Notre kit ELISA contre le Toxoplasma gondii humain est destiné à mesurer les taux de Toxo-Ab dans le sérum humain, le plasma, les milieux de culture ou tout fluide biologique.
 
Principe
Cette trousse d'ELISA utilise la méthode Sandwich-ELISA. La bande de Microelisa fournie dans cette trousse a été pré-couverte d'un antigène spécifique à Toxo-Ab.Des normes ou des échantillons sont ajoutés aux puits de stripplate Microelisa appropriés et combinés à l'antigène spécifique.. Ensuite, un antigène conjugué à la réticulase de raifort (HRP) spécifique à Toxo est ajouté à chaque stripplate Microelisa et incubé. Les composants libres sont lavés.La solution de substrat TMB est ajoutée à chaque puitsSeuls les puits contenant Toxo-Ab et l'antigène Toxo conjugué HRP apparaîtront en bleu, puis deviendront jaunes après l'ajout de la solution d'arrêt.La densité optique (OD) est mesurée spectrophotométriquement à une longueur d'onde de 450 nmLa présence de Toxo-Ab est déterminée par comparaison avec la valeur de CUTOFF.
Matériaux fournis avec le kit
Matériaux fournis avec le kit 96
1 Manuel d'utilisation 1 R.T.
2 Membrane de plaque de fermeture 2 R.T.
3 sacs scellés 1 RT
4 Microelisa stripplate 1 à 8°C
Contrôle négatif 0,5 ml × 1 flacon 2-8°C
Contrôle positif 0,5 ml × 1 flacon 2-8°C
7 Réactif HRP-conjugué 6 ml × 1 flacon 2-8°C
8 diluant d' échantillon 6 ml × 1 flacon 2-8°C
9 Chromogène Solution A 6 ml × 1 flacon 2-8°C
10 Chromogène Solution B 6 ml × 1 flacon 2-8°C
Arrêtez la solution 6 ml×1 flacon 2-8°C
12 solution de lavage 20 ml (30X) × 1 flacon à 2-8°C
 
Préparation des échantillons
1Préparation du sérum
Après avoir prélevé le sang entier, laissez le sang coaguler en le laissant intact à température ambiante. Cela prend généralement 10 à 20 minutes.000 tours par minute pendant 20 minutesSi des précipitations apparaissent lors de la réservation, l'échantillon doit être centrifugé à nouveau.
2Préparation du plasma
Rassembler le sang entier dans des tubes contenant un anticoagulant (EDTA ou citrate) après incubation à température ambiante pendant 10 à 20 minutes, centrifuger les tubes pendant 20 minutes à 2 000 à 3 000 tr/min.Ramasser soigneusement le surnaturant sous forme d'échantillons de plasmaSi des précipitations apparaissent lors de la réservation, l'échantillon doit être centrifugé à nouveau.
3. échantillons d' urine
Récupérer l'urine dans des tubes aseptiques. Récupérer soigneusement le supernatant après centrifugation pendant 20 min à 2 000 à 3 000 tr/min. Si des précipitations apparaissent pendant la réservation,l'échantillon doit être centrifugé à nouveauLe procédé de préparation du liquide céphalo-rachidien et du liquide pleuropéritonéal est le même que celui de l'échantillon d'urine.
4. échantillons de cellules
Si l'on veut détecter les sécrétions de cellules, on recueille le surnaturant de culture dans des tubes aseptiques. On recueille le surnaturant avec soin après centrifugation pendant 20 min à 2000-3000 tr/min.Si vous voulez détecter les composants intracellulairesLes cellules ont été détruites pour libérer des composants intracellulaires par congélation et décongélation répétées.Ramasser soigneusement le supernatant après centrifugation pendant 20 min à 2Si des précipitations apparaissent pendant la réservation, l'échantillon doit être centrifugé à nouveau.
5. échantillons de tissus
Les échantillons de tissus sont coupés, pesés, congelés dans de l'azote liquide et conservés à -80°C pour une utilisation ultérieure.Ramasser soigneusement le supernatant après centrifugation pendant 20 min à 2Aliquot le supernatant pour l'essai ELISA et une utilisation future.
 
Nom de l'entreprise:
1L'extraction d'échantillons et l'analyse ELISA doivent être effectuées dès que possible après la collecte des échantillons.Si le test ELISA ne peut pas être effectué immédiatement, les échantillons peuvent être conservés à -20°C. Des cycles répétés de congélation-dégel doivent être évités.
2Nos kits ne peuvent pas être utilisés pour les échantillons contenant du NaN3 qui peuvent inhiber l'activité du HRP.
Procédure d'évaluation
 
Procédure
1. Dans la bande de Microelisa, laissez deux puits comme contrôle négatif, deux puits comme contrôle positif et un puits vide comme contrôle en blanc.l'échantillon correspondant du trou microporeux 2 par planche doit être un témoin négatif et un témoin positif 2 trous, ck 1 trou (ck trou sans échantillons et réactif HRP-conjugué, le reste de la même opération étape)
2. Ajout d'échantillons: les témoins négatifs et positifs d'un volume de 50 μl sont ajoutés respectivement aux puits de contrôle négatifs et positifs.40 μl de tampon de dilution d'échantillon et 10 μl d'échantillon sont ajoutésLes échantillons doivent être chargés sur le fond sans toucher la paroi du puits.
3Incuba­tion: incubation pendant 30 min à 37°C après scellé avec une membrane de plaque de fermeture.
4Dilution: diluer le tampon de lavage concentré avec de l'eau distillée (30 fois pour 96 T).
5. Laver: dépouiller soigneusement la membrane de la plaque de fermeture, aspirer et remplir de nouveau la solution de lavage. Jeter la solution de lavage après avoir reposé pendant 30 secondes. Répéter la procédure de lavage 5 fois.
6. Ajouter 50 μl de réactif HRP-conjugué à chaque puits, sauf le puits témoin vierge.
7L'incubation est décrite à l'étape 3.
8. Le lavage tel que décrit à l'étape 5.
9. Coloration: ajouter 50 μl de solution de chromogène A et 50 μl de solution de chromogène B à chaque puits, mélanger en agitant doucement et incuber à 37°C pendant 15 minutes.
10. Termination: ajouter 50 μl de solution d'arrêt à chaque puits pour mettre fin à la réaction. La couleur du puits doit changer de bleu à jaune.
11. Lire la surdose d'absorbance à 450 nm à l'aide d'un lecteur de plaque Microtiter. La valeur de surdose du puits de contrôle en blanc est définie à zéro. L'essai doit être effectué dans les 15 minutes suivant l'ajout de la solution d'arrêt.
Déterminer le résultat
Efficacité de l'essai: valeur moyenne du contrôle positif ≥ 1.00; la valeur moyenne du contrôle négatif ≤ 0.10.
Calcul de la valeur critique (CUT OFF): valeur critique = valeur moyenne du contrôle négatif + 0.15
Juge négatif: si la valeur OD < CUT OFF, l'échantillon est négatif pour la toxine humaine Ab.
Juge positif: si la valeur OD est ≥ CUT OFF, l'échantillon est positif pour la toxo-Ab humaine.
Les notes
2. Conserver le kit à 4°C à la réception.Le kit doit être équilibré à température ambiante avant l'analyse. Retirer toutes les bandes inutiles de la plaque recouverte d'antigène Toxo,les recouvrir dans une feuille à fermeture à glissière et les conserver à 4°C.
3. Des précipitations peuvent apparaître dans le tampon de lavage concentré. Veuillez chauffer le tampon pour dissoudre tous les précipitations, ce qui n'affectera pas les résultats.
4. Afin d'éviter la contamination croisée, les membranes de la plaque de fermeture ne sont destinées qu'à un usage unique.
Veuillez garder le substrat à l' écart de la lumière.
6. Toutes les opérations doivent être effectuées conformément aux instructions du fabricant.
7. Tous les échantillons, le tampon de lavage et les déchets doivent être traités comme des agents infectieux.
8. Les réactifs provenant de lots différents ne doivent pas être mélangés.
Entreposage et durée de validité
1. Conservation à 2 à 8°C.
2.Période de validité: 6 mois