Anticorps humain de gondii de toxoplasme (Toxo-ab) ELISA Kit

Anticorps humain de gondii de toxoplasme (Toxo-ab) ELISA Kit
 
 
En sérum, plasma, milieux de culture ou tout fluide biologique.
 
POUR L'USAGE DE RECHERCHES SEULEMENT !
PAS POUR DES APPLICATIONS THÉRAPEUTIQUES OU DIAGNOSTIQUES !
VEUILLEZ LA PROCÉDURE ENTIÈRE DE TRANSLECTURE AVANT LE DÉBUT !
POUR L'USAGE DE RECHERCHES SEULEMENT
But
Notre kit humain de l'anticorps de gondii de toxoplasme (Toxo-ab) ELISA est d'analyser les niveaux Toxo-ab en sérum humain, plasma, milieux de culture ou n'importe quel fluide biologique.
 
Principe
Ce kit d'ELISA emploie le sandwich-ELISA comme méthode. Le stripplate de Microelisa fourni dans ce kit a été enduit d'un préenduisage avec de l'antigène spécifique au Toxo-ab. Des normes ou les échantillons sont ajoutés aux puits appropriés de stripplate de Microelisa et ont combiné à l'antigène spécifique. Puis une peroxydase de raifort (HRP) - antigène conjugué spécifique pour Toxo est ajoutée à chaque stripplate de Microelisa bien et incubée. Des composants libres sont enlevés. La solution de substrat de TMB est ajoutée à chaque puits. Seulement ces puits qui contiennent le Toxo-ab et l'antigène de Toxo conjugué par HRP sembleront bleus en couleurs et puis tourneront jaune après l'addition de la solution d'arrêt. La densité optique (OD) est mesurée spectrophotométriquement à une longueur d'onde de 450 nanomètre. La présence du Toxo-ab est déterminée en rivalisant avec la valeur de COUPURE.
Matériaux équipés de kit
Les matériaux ont fourni en stockage de déterminations du kit 96
1 manuel d'utilisation 1 R.T.
Membrane 2 R.T. de plat de fermeture 2.
3 sacs scellés 1 R.T.
Stripplate 1 2-8℃ de 4 Microelisa
5 bouteille négative 2-8℃ du contrôle 0.5ml×1
6 bouteille positive 2-8℃ du contrôle 0.5ml×1
7 bouteille 2-8℃ du réactif 6ml×1 de HRP-conjugué
8 bouteille 2-8℃ du diluant 6ml×1 témoin
Solution de 9 chromogènes 6ml×1 une bouteille 2-8℃
10 bouteille 2-8℃ de la solution B 6ml×1 de chromogène
11 arrêtez la bouteille 2-8℃ de la solution 6ml×1
solution 20ml (30X) ×1bottle 2-8℃ du lavage 12
 
Préparation témoin
1. préparation de sérum
Après la collection du sang total, permettez au sang de coaguler en le laissant calme à la température ambiante. Ceci prend habituellement 10-20 minutes. Enlevez le caillot par la centrifugation à 2,000-3,000 t/mn pendant 20 minutes. Si les précipités apparaissent pendant la réservation, l'échantillon devrait centrifugated encore.
2. préparation de plasma
Rassemblez le sang total dans des tubes avec l'anticoagulant (EDTA ou citrate). Après incubé à la température ambiante pendant 10-20 minutes, des tubes centrifugated pour la minute 20 à 2,000-3,000 t/mn. Rassemblez le surnageant soigneusement comme échantillons de plasma. Si les précipités apparaissent pendant la réservation, l'échantillon devrait centrifugated encore.
3. échantillons d'urine
Prélevez l'urine dans les tubes aseptiques. Rassemblez le surnageant soigneusement après centrifugation pour la minute 20 à 2,000-3,000 t/mn. Si les précipités apparaissent pendant la réservation, l'échantillon devrait centrifugated encore. La procédure de préparation du fluide céphalo-rachidien et du fluide pleuroperitoneal est identique que celle de l'échantillon d'urine.
4. échantillons de cellules
Si vous voulez détecter les sécrétions des cellules, rassemblez le surnageant de culture dans les tubes aseptiques. Rassemblez le surnageant soigneusement après centrifugation pour la minute 20 à 2,000-3,000 t/mn. Si vous voulez détecter les composants intracellulaires, diluez les cellules à 1X106/ml avec PBS (pH 7.2-7.4). Les cellules ont été détruites pour libérer les composants intracellulaires par la congélation répétée et le dégel. Rassemblez le surnageant soigneusement après centrifugation pour la minute 20 à 2,000-3,000 t/mn. Si les précipités apparaissent pendant la réservation, l'échantillon devrait centrifugated encore.
5. prélèvements de tissu
Des prélèvements de tissu sont coupés, pesés, gelés en azote liquide et stockés à -80℃ pour une utilisation future. Les prélèvements de tissu ont été homogénéisés après avoir ajouté PBS (pH 7,4). Des échantillons devraient être actionnés à 4℃. Rassemblez le surnageant soigneusement après centrifugation pour la minute 20 à 2,000-3,000 t/mn. Partie aliquote le surnageant pour l'analyse d'ELISA et le futur usage.
 
Notes :
1. l'extraction témoin et l'analyse d'ELISA devraient être exécutées dès que possible après collection témoin. Les échantillons devraient être extraits selon la littérature appropriée. Si l'analyse d'ELISA ne peut pas être exécutée immédiatement, des échantillons peuvent être stockés à -20℃.Repeated des cycles que gel-dégel devraient être évités.
2. Nos kits ne peuvent pas être employés pour des échantillons avec NaN3 qui peut empêcher l'activité de HRP.
Procédure d'analyse
 
Procédure
1. Dans le stripplate de Microelisa, laissez deux puits en tant que contrôle négatif, deux puits en tant que contrôle positif et un bien vide qu'en tant que contrôle vide. Nombre : le nombre séquentiel, échantillon correspondant du trou microporeux 2 par conseil devrait placer le contrôle négatif et les trous positifs du contrôle 2, le trou des CK 1 (trou des CK sans échantillons et réactif de HRP-conjugué, le reste de la même opération d'étape)
2. ajouter des échantillons : Le contrôle négatif et positif en volume de 50μl sont ajoutés aux puits négatifs et positifs de contrôle respectivement. Dans des puits témoin, le tampon de dilution de l'échantillon 40μl et l'échantillon 10μl sont ajoutés. Des échantillons devraient être chargés sur le fond sans toucher le mur bon. Mélangez bien à la secousse douce.
3. incubation : incubez la minute 30 à 37℃ après scellé avec la membrane de plat de fermeture.
4. dilution : diluez le tampon de lavage concentré avec de l'eau distillée (30 fois pour 96T).
5. lavage : épluchez soigneusement la membrane de plat de fermeture, l'aspirez et la remplissez avec la solution de lavage. Jetez la solution de lavage après le repos pendant 30 secondes. Répétez la procédure de lavage pendant 5 fois.
6. ajoutez le réactif de HRP-conjugué de 50 μl à chaque puits excepté le contrôle vide bien.
7. incubation comme décrit dans l'étape 3.
8. lavage comme décrit dans l'étape 5.
9. coloration : Ajoutez la solution A de chromogène de 50 μl et la solution B à chaque puits, mélange de chromogène de 50 μl avec secouer doucement et incubez à 37℃ pendant 15 minutes. Veuillez éviter la lumière pendant la coloration.
10. arrêt : additionnez 50 que le μl cessent la solution à chaque puits pour terminer la réaction. La couleur dans le puits devrait changer du bleu pour jaunir.
11. lisez l'absorbance O.D. à 450nm utilisant un lecteur de plat de microtitre. La valeur d'OD du contrôle vide bien est placée en tant que zéro. L'analyse devrait être effectuée d'ici 15 minutes après s'être ajouté arrêtent la solution.
Déterminez le résultat
Efficacité d'essai : la valeur moyenne du contrôle positif ≥1.00 ; la valeur moyenne du contrôle négatif ≤0.10.
Le calcul de valeur critique (DÉCOUPÉE) : valeur critique = la valeur moyenne du contrôle négatif + 0,15
Jugement négatif : si le jugement positif< CUT="" OFF=""> de valeur d'OD : si le ≥ de valeur d'OD DÉCOUPAIT, l'échantillon est le positif Toxo-ab humain.
Notes
2. magasin le kit à 4°C sur le reçu. Le kit devrait être equilibrat4ed à la température ambiante avant l'analyse. Enlevez toutes les bandes inutiles de l'antigène de Toxo - plat enduit, rescellez-les dans l'aluminium zip-lock et gardez à 4°C.
3. les précipités peuvent apparaître dans le tampon de lavage concentré. Veuillez chauffer le tampon pour dissoudre tous les précipités, qui n'affecteront pas les résultats.
4. afin d'éviter la contamination transversale, les membranes de plat de fermeture sont pour l'usage ancien seulement.
5. Veuillez garder le substrat à partir de la lumière.
6. Toute l'opération devrait être accord avec les instructions du fabricant strictement. Les résultats déterminés par le lecteur de stripplate de Microelisa.
7. Tous les échantillons, tampon de lavage et déchets devraient être traités comme agents infectieux.
8. des réactifs de différents sorts ne devraient pas être mélangés.
Stockage et validité
1.Storage : 2-8℃.
2.Duration : 6 mois