Anticorps aviaire de brucella (Brucella-ab) ELISA Kit

Kit ELISA pour les anticorps à la brucelle aviaire (Brucella-Ab)

À des fins de recherche uniquement!

Ne pas utiliser à des fins thérapeutiques ou diagnostiques!

S'il vous plaît lire la procédure avant de commencer.

Paquet: 96T

Les échantillons:Dans le sérum, le plasma, les milieux de culture ou tout fluide biologique.

Objectif

Notre trousse ELISA anti-Brucella (Brucella-Ab) est destinée à évaluer les taux de Brucella-Ab dans le sérum, le plasma, les milieux de culture ou tout fluide biologique des oiseaux.

Principe

Cette trousse d'ELISA utilise la méthode Sandwich-ELISA. La bande de Microelisa fournie dans cette trousse a été pré-couverte d'un antigène spécifique à la Brucella-Ab.Des normes ou des échantillons sont ajoutés aux puits de stripplate Microelisa appropriés et combinés à l'antigène spécifique.. Ensuite, un antigène conjugué à la peroxydase du raifort (HRP) spécifique à la Brucella est ajouté à chaque stripplate de Microelisa et incubé. Les composants libres sont lavés.La solution de substrat TMB est ajoutée à chaque puitsSeuls les puits qui contiennent Brucella-Ab et l' antigène de Brucella conjugué HRP apparaîtront en bleu, puis deviendront jaunes après l' addition de la solution d'arrêt.La densité optique (OD) est mesurée spectrophotométriquement à une longueur d'onde de 450 nmLa présence de Brucella-Ab est déterminée par comparaison avec la valeur de CUTOFF.

Matériaux fournis avec le kit

Préparation des échantillons

1.Préparation sérique

Après avoir prélevé le sang entier, laissez le sang coaguler en le laissant intact à température ambiante. Cela prend généralement 10 à 20 minutes.000 tours par minute pendant 20 minutesSi des précipitations apparaissent lors de la réservation, l'échantillon doit être centrifugé à nouveau.

2.Préparation du plasma

Rassembler le sang entier dans des tubes contenant un anticoagulant (EDTA ou citrate) après incubation à température ambiante pendant 10 à 20 minutes, centrifuger les tubes pendant 20 minutes à 2 000 à 3 000 tr/min.Ramasser soigneusement le surnaturant sous forme d'échantillons de plasmaSi des précipitations apparaissent lors de la réservation, l'échantillon doit être centrifugé à nouveau.

3.échantillons d'urine

Récupérer l'urine dans des tubes aseptiques. Récupérer soigneusement le supernatant après centrifugation pendant 20 min à 2 000 à 3 000 tr/min. Si des précipitations apparaissent pendant la réservation,l'échantillon doit être centrifugé à nouveauLe procédé de préparation du liquide céphalo-rachidien et du liquide pleuropéritonéal est le même que celui de l'échantillon d'urine.

4.Échantillons de cellules

Si l'on veut détecter les sécrétions de cellules, on recueille le surnaturant de culture dans des tubes aseptiques. On recueille le surnaturant avec soin après centrifugation pendant 20 min à 2000-3000 tr/min.Si vous voulez détecter les composants intracellulairesLes cellules ont été détruites pour libérer des composants intracellulaires par congélation et décongélation répétées.Ramasser soigneusement le supernatant après centrifugation pendant 20 min à 2Si des précipitations apparaissent pendant la réservation, l'échantillon doit être centrifugé à nouveau.

5.échantillons de tissus

Les échantillons de tissus sont coupés, pesés, congelés dans de l'azote liquide et conservés à -80°C pour une utilisation ultérieure.Ramasser soigneusement le supernatant après centrifugation pendant 20 min à 2Aliquot le supernatant pour l'essai ELISA et une utilisation future.

Nom de l'entreprise:

1.L'extraction d'échantillons et l'analyse ELISA doivent être effectuées dès que possible après la collecte des échantillons.Si le test ELISA ne peut pas être effectué immédiatement, les échantillons peuvent être conservés à -20°C. Des cycles répétés de congélation-dégel doivent être évités.

2Nos kits ne peuvent pas être utilisés pour les échantillons contenant du NaN3 qui peuvent inhiber l'activité du HRP.

Procédure

1Dans la plaque à rayures Microelisa, laisser deux puits comme contrôle négatif, deux puits comme contrôle positif et un puits vide comme contrôle en blanc.l'échantillon correspondant du trou microporeux 2 par planche doit être un témoin négatif et un témoin positif 2 trous, ck 1 trou (ck trou sans échantillons et réactif HRP-conjugué, le reste de la même opération étape)

2. Ajout d'échantillons: les témoins négatifs et positifs d'un volume de 50 μl sont ajoutés respectivement aux puits de contrôle négatifs et positifs.40 μl de tampon de dilution d'échantillon et 10 μl d'échantillon sont ajoutésLes échantillons doivent être chargés sur le fond sans toucher la paroi du puits.

3Incuba­tion: incubation pendant 30 min à 37°C après scellé avec une membrane de plaque de fermeture.

4Dilution: diluer le tampon de lavage concentré avec de l'eau distillée (30 fois pour 96 T).

5. Laver: dépouiller soigneusement la membrane de la plaque de fermeture, aspirer et remplir de nouveau la solution de lavage. Jeter la solution de lavage après avoir reposé pendant 30 secondes. Répéter la procédure de lavage 5 fois.

6. Ajouter 50 μl de réactif HRP-conjugué à chaque puits, sauf le puits témoin vierge.

7L'incubation est décrite à l'étape 3.

8. Le lavage tel que décrit à l'étape 5.

9. Coloration: ajouter 50 μl de solution de chromogène A et 50 μl de solution de chromogène B à chaque puits, mélanger en agitant doucement et incuber à 37°C pendant 15 minutes.

10. Termination: ajouter 50 μl de solution d'arrêt à chaque puits pour mettre fin à la réaction. La couleur du puits doit changer de bleu à jaune.

11. Lire la surdose d'absorbance à 450 nm à l'aide d'un lecteur de plaque Microtiter. La valeur de surdose du puits de contrôle en blanc est réglée à zéro. L'essai doit être effectué dans les 15 minutes suivant l'ajout de la solution d'arrêt.

Déterminer le résultat

Efficacité de l'essai: valeur moyenne du contrôle positif ≥ 1.00; la valeur moyenne du contrôle négatif ≤ 0.10.

Calcul de la valeur critique (CUT OFF): valeur critique = valeur moyenne du contrôle négatif + 0.15

Juge négatif: si la valeur OD est < CUT OFF, l'échantillon est négatif à la brucellose aviaire Ab.

Juge positif: si la valeur OD est ≥ CUT OFF, l'échantillon est positif pour la brucellose aviaire Ab.

Les notes

1. Conserver le kit à 4°C à la réception.Le kit doit être équilibré à température ambiante avant l'analyse. Retirer les bandes inutiles de la plaque recouverte d'antigène de Brucella,les recouvrir dans une feuille à fermeture à glissière et les conserver à 4°C.
2. Des précipitations peuvent apparaître dans le tampon de lavage concentré.
3. Afin d'éviter la contamination croisée, les membranes de plaque de fermeture ne sont destinées qu'à un usage unique.
4. Veuillez garder le substrat à l'écart de la lumière.
5. Toutes les opérations doivent être effectuées conformément strictement aux instructions du fabricant, les résultats étant déterminés par le lecteur de bande de Microelisa.
6. Tous les échantillons, le tampon de lavage et les déchets doivent être traités comme des agents infectieux.
7. Les réactifs de lots différents ne doivent pas être mélangés.

Entreposage et durée de validité

1. Conservation à 2 à 8°C.

2.Période de validité: 6 mois