Insuline humaine (Institut central des statistiques) ELISA Kit

Kit ELISA pour l' insuline humaine

Types d' échantillons:sérum, plasma sanguin, salive, urine etautres tissus apparentés.
 

Utilisation prévue
Ce kit est utilisé pour évaluer l'insuline (INS) dans l'échantillon de sérum humain, de plasma sanguin et d'autres tissus connexes.
 

Principe de l'essai
Le kit utilise un test d'immunosorbent lié à l'enzyme (ELISA) à double anticorps sandwich pour évaluer le niveau d'insuline humaine (INS) dans les échantillons.Ajouter de l'insuline ((INS) à l'anticorps monoclonal Enzyme well qui est pré-enduit avec de l'insuline humaine ((INS) anticorps monoclonal, l' incubation; ensuite, ajouter des anticorps Insulin(INS) étiquetés avec de la biotine, et combinés avec Streptavidin-HRP pour former un complexe immunitaire;ensuite effectuer l'incubation et le lavage à nouveau pour enlever l'enzyme non combinéePuis ajouter la solution de chromogène A, B, la couleur du liquide change en bleu, et à l'effet de l'acide, la couleur devient enfin jaune.Le chromat de couleur et la concentration de la substance humaine insuline (INS) de l'échantillon ont été positivement corrélés..
Matériaux fournis dans le kit d'essai
 

Matériaux requis mais non fournis
1. incubateur à 37 °C 2. lecteur d'enzyme standard
3- Pipettes de précision et tuyaux jetables 4.
5- Tubes jetables pour la dilution des échantillons 6.
 

Notes importantes
1Si les plaques enduites d'Enzyme n'ont pas été utilisées après ouverture, la batterie doit être placée dans un endroit où la température ambiante n'est pas suffisante.les autres plaques doivent être conservées dans un sac scellé.
2Pour chaque étape, ajouter l'échantillon avec l'injecteur d'échantillon qui doit être calibré fréquemment, afin d'éviter des tolérances expérimentales inutiles.
3. l'opération doit être effectuée conformément aux instructions strictement et les résultats des essais doivent être basés sur les relevés du lecteur d'enzymes.
4Pour éviter la contamination croisée, il est interdit de réutiliser la tête d'aspiration et la membrane de la plaque d'étanchéité dans vos mains.
5. Tous les échantillons, le tampon de lavage et chaque type de rejet doivent être selon le procédé du matériau infectieux.
6. Les agents inactifs doivent être placés ou recouverts. Ne pas utiliser le réactif avec des lots différents. Et les utiliser avant la date de péremption.
7Le substrat B est sensible à la lumière, une exposition prolongée à la lumière est interdite.
 

Méthode de lavage
Méthode de lavage manuel:secouez le liquide restant dans les plaques enzymatiques, placez des feuilles de papier sur le banc d'essai et battez fortement les plaques à l'envers.35 ml de solution de lavage après dilution dans le puitsRépétez ce processus selon vos besoins.
Méthode de lavage automatique:s'il existe une machine à laver automatique, elle ne doit être utilisée dans l'essai que si vous connaissez bien sa fonction et ses performances.
 

Précision
Précision dans l'essai: 3 échantillons présentant des niveaux faibles, moyens et élevés d'INS humain ont été testés 20 fois sur une seule plaque, respectivement.
Précision entre les essais: 3 échantillons présentant un faible, moyen et haut niveau d'INS humain ont été testés sur 3 plaques différentes, 8 réplications dans chaque plaque.
CV ((%) = SD/moyenneX100
Le taux de dépistage de la maladie est supérieur à 10%.
Inter-analyse: CV< 12%
 

Exigences relatives aux échantillons

1. Impossible de détecter l'échantillon contenant du NaN3, car le NaN3 inhibe l'activité du HRP.
2. extraire le plus tôt possible après la collecte des spécimens et selon la littérature pertinente, et doit être expérimenté le plus tôt possible après l'extraction.l'échantillon peut être conservé à -20 °C pour préserverÉvitez les cycles de congélation et de décongélation répétés.
3. sérum- coagulation à température ambiante 10-20 min, centrifugation 20 min à la vitesse de 2000-3000 tours/min. éliminer le supernatant, si des précipitations sont apparues, centrifugez à nouveau.
4- utilisation plasmatique appropriée EDTA ou plasma citrate comme anticoagulant, mélangez pendant 10 à 20 min, centrifugez pendant 20 min à une vitesse de 2000 à 3000 tr/min.
5. collecte d'urine dans un récipient stérile, centrifugation 20 min à la vitesse de 2000-3000 r.p.m. enlever le surnaturant, si des précipitations sont apparues, centrifugez à nouveau.L'opération de l'hydrothorax et du liquide céphalo-rachidien.
6- culture cellulaire - détection des composants sécrétoires, collecte dans un récipient stérile, centrifugation 20 min à une vitesse de 2000 à 3000 tr/min.Suspension de cellule diluée avec PBS ((PH7).2-7.4), la concentration cellulaire atteint 1 million / ml, cycles de congélation et de dégel répétés, dommages aux cellules et libération de composants intracellulaires, centrifugation 20 min à une vitesse de 2000-3000 tr/min.éliminer le surnaturantSi des précipitations apparaissent, centrifugez à nouveau.
7.échantillons de tissus- Après coupure des échantillons, vérifier le poids, ajouter du PBS ((PH7.2-7.4), congeler rapidement avec de l'azote liquide, maintenir les échantillons à 2-8°C après fusion, ajouter du PBS ((PH7.4),Homogénéisés à la main ou à la meuleuse, centrifugez pendant 20 min à une vitesse de 2000-3000 tr/h pour enlever le surnaturant.